重组人GARNL3蛋白:实验方案与使用指南
重组人GARNL3蛋白:实验方案与使用指南
Recombinant Human GARNL3 Protein是一种研究级试剂,专为针对GTPase激活Rap/Ran-GAP结构域信号轴的生化、细胞及蛋白质相互作用研究而设计。
- 产品名称
- 重组人GARNL3蛋白
- 货号
- rp372904
- 蛋白来源
- 人(智人)
- 形态
- 重组蛋白;具体配方详见产品说明书
- 推荐储存条件
- 长期储存于-80°C;避免反复冻融
- 应用
- 生化检测、蛋白质相互作用研究、细胞功能实验
背景:GARNL3蛋白生物学
GARNL3(GTPase激活Rap/RanGAP结构域样蛋白3),在部分文献中亦称为RASAL3,属于RasGAP超家族成员。其保守的GAP结构域可加速Ras家族小GTPase的内在GTPase活性,从而负调控下游Ras/MAPK及相关信号级联。GARNL3与免疫细胞功能相关,尤其参与淋巴细胞活化与分化的调控,并已成为肿瘤学和免疫学研究的关注焦点。用于研究的重组人GARNL3蛋白使研究人员能够在体外研究其酶活性、结合伴侣及调控功能,而无需依赖内源性表达系统。
复溶方案
复溶前,将小瓶在低速(如1,000 × g,30秒)下短暂离心,以收集沉积于管壁或瓶盖上的冻干物料。按产品说明书指定,用无菌超纯水或适当缓冲液复溶蛋白。常用复溶缓冲液为含0.1% BSA的PBS(pH 7.4),以增强稳定性并减少吸附损失。
操作步骤:
- 开封前将小瓶在室温平衡5–10分钟。
- 将推荐体积的复溶缓冲液沿小瓶内壁缓慢加入。
- 轻轻旋转或用移液管混匀;切勿涡旋,以免蛋白变性。
- 在室温静置5分钟,确保完全溶解。
- 目视检查溶液是否澄清;如有颗粒物,应丢弃。
货号rp372904的具体复溶体积和缓冲液组成,请参阅相应产品说明书。
储存、稳定性与操作注意事项
短期储存:若配方中含有载体蛋白(如BSA),复溶后的蛋白可在4°C储存最长1周。注意观察是否出现沉淀或活性下降。
长期储存:将复溶蛋白分装为单次使用量,以避免反复冻融,并储存于-80°C。每次冻融循环均可能逐渐降低蛋白活性和完整性。
一般操作注意事项:
- 尽量在冰上操作,以减少热降解。
- 使用低蛋白结合管和移液器吸头,以减少表面吸附。
- 避免接触去污剂或变性剂,除非特定实验有此要求。
- 记录批次号和复溶日期,以便追溯。
货号rp372904的具体稳定性数据,请参阅产品说明书或联系Aladdin Scientific技术支持。
常见实验应用指南
重组人GARNL3蛋白适用于多种体外研究应用。以下为通用指导原则;请始终根据您的具体实验体系进行经验性优化:
GTPase活性检测:GARNL3可作为GAP结构域试剂,用于评估其对靶标小GTPase(如Ras家族成员)GTP水解的促进作用。常采用比色法或荧光法磷酸释放检测(如孔雀石绿法或MESG/嘌呤核苷磷酸化酶偶联法)。
蛋白质相互作用研究:利用pull-down实验、共免疫沉淀或表面等离子体共振(SPR)表征GARNL3与潜在结合伴侣之间的相互作用。避免苛刻的变性条件,以确保蛋白维持天然构象。
Western Blot阳性对照:重组GARNL3可作为阳性对照或分子量参考,用于Western blot实验中抗GARNL3抗体的验证。
ELISA标准品:重组蛋白可用于夹心ELISA格式中生成标准曲线,以定量生物样品中内源性GARNL3的水平。
所有工作浓度均应经验性滴定确定。建议参阅同行评审文献及Aladdin Scientific产品说明书获取推荐起始浓度。
质量控制与故障排除
质量控制:每批重组人GARNL3蛋白均经过标准质量控制检测,通常包括SDS-PAGE或考马斯亮蓝染色以评估纯度,以及适用时的功能活性检测。随每批货物提供的质量检验报告(CoA)包含批次特定的纯度、浓度和内毒素数据。使用前请务必查阅CoA。
常见问题与故障排除:
| 问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 复溶后出现沉淀 | 缓冲液不当、过度涡旋或蛋白聚集 | 轻轻离心(10,000 × g,5分钟,4°C),取上清使用;核实缓冲液组成 |
| 活性低或无活性 | 冻融降解或储存不当 | 使用新鲜复溶的分装品;确保-80°C储存 |
| Western blot出现非特异性条带 | 抗体交叉反应或蛋白降解 | 通过SDS-PAGE检查蛋白完整性;验证抗体特异性 |
| ELISA本底偏高 | 蛋白吸附或缓冲液不相容 | 添加BSA或封闭剂;优化洗涤步骤 |
如需更多技术支持,请携带批次号和实验详情联系Aladdin Scientific客户服务。
常见问题
重组人GARNL3蛋白的推荐复溶缓冲液是什么?
复溶缓冲液应按照货号rp372904产品说明书的规定使用。通常,含0.1% BSA的无菌PBS(pH 7.4)是重组蛋白常用的推荐缓冲液,可维持稳定性并减少吸附损失。请务必参阅CoA和说明书获取批次特定说明。
如何储存重组人GARNL3蛋白以保持其活性?
长期储存时,将复溶蛋白分装为单次使用量并储存于-80°C,以避免反复冻融。如需在一周内短期使用,且配方含有BSA等稳定性载体蛋白,可在4°C储存。应避免冻融循环,因为每次冻融均可能逐渐降低蛋白完整性和活性。
重组人GARNL3蛋白经过验证可用于哪些实验应用?
重组人GARNL3蛋白适用于GTPase活性检测、蛋白质相互作用研究(pull-down、共免疫沉淀、SPR)、Western blot阳性对照以及ELISA标准曲线制备等应用。货号rp372904经验证的具体应用详见产品说明书;用户应确认适用性并针对其特定实验体系优化条件。
收到货物后,如何验证重组人GARNL3蛋白的纯度和完整性?
收到货物后,请查阅随货提供的质量检验报告(CoA),获取批次特定的纯度、浓度和内毒素数据(通常通过SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色评估)。您也可自行进行SDS-PAGE,确认预期分子量条带并评估降解情况。如结果与CoA不符,请联系Aladdin Scientific技术支持。
参考文献
- Kupzig S, et al. GAP1 family members constitute bifunctional Ras and Rap GTPase-activating proteins. J Biol Chem. 2006;281(15):9891-9900.
- Bernards A. GAPs galore! A survey of putative Ras superfamily GTPase activating proteins in man and Drosophila. Biochim Biophys Acta. 2003;1603(2):47-82.
- Aladdin Scientific. Recombinant Human GARNL3 Protein (rp372904) Product Datasheet. Aladdin Scientific.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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