重组人GNG11蛋白:特性与研究指南
重组人GNG11蛋白:特性与研究指南
Recombinant Human GNG11 Protein是异三聚体G蛋白γ-11亚基的研究级重组形式,对于研究GPCR介导的信号转导通路及其在细胞生理和疾病中的作用具有重要价值。
- 产品名称
- 重组人GNG11蛋白
- 货号
- rp368014
- 基因名称
- GNG11(G蛋白γ亚基11)
- 蛋白家族
- 异三聚体G蛋白γ亚基家族
- 物种来源
- 人源(智人)
- 主要应用
- 信号转导研究、蛋白互作研究、GPCR通路分析
- 供应商参考
- absea#PP-26056
GNG11的生物学背景
GNG11编码异三聚体鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(G蛋白)的γ-11亚基,是G蛋白偶联受体(GPCR)下游细胞内信号传导的核心介质。异三聚体G蛋白由三个亚基组成:α(Gα)、β(Gβ)和γ(Gγ)。由β和γ亚基组成的Gβγ二聚体作为功能单元,调控腺苷酸环化酶、磷脂酶C及多种离子通道等效应蛋白。
包括GNG11在内的γ亚基对于Gβγ复合物通过脂质修饰(通常为C末端CaaX基序的异戊二烯化)锚定于膜上以及赋予Gβγ-效应蛋白相互作用的特异性至关重要。GNG11在多种人体组织中表达,与心血管调节、血管生成及更广泛的GPCR信号网络有关。在某些疾病背景下已观察到GNG11表达的失调,使其成为机制研究和转化研究的相关靶点。
重组蛋白制备与质量注意事项
重组人GNG11蛋白(rp368014)采用重组表达系统生产,提供适用于体外生化和细胞实验的研究级蛋白。在使用GNG11等重组G蛋白亚基时,研究人员应注意以下质量和操作参数:
- 表达系统:重组γ亚基通常在细菌(如大肠杆菌)、昆虫(杆状病毒)或哺乳动物系统中表达。表达系统的选择会影响翻译后修饰(如异戊二烯化),这对天然膜结合至关重要。请参阅产品说明书了解表达系统详情。
- 纯度:研究级重组蛋白应满足规定的纯度要求,通常通过SDS-PAGE和/或HPLC进行评估。请从产品质量检验报告(CoA)确认纯度规格。
- 配方与储存:冻干或溶液配方需要特定的复溶和储存条件以维持蛋白活性。请按产品说明书指引储存;避免反复冻融。
- 功能验证:在关键实验中使用前,通过适合您实验体系的功能实验确认生物活性。
重组人GNG11蛋白的研究应用
重组人GNG11蛋白支持细胞生物学、生物化学和药理学领域的多种实验应用,主要包括:
- 蛋白质-蛋白质相互作用研究:GNG11可用于pull-down实验、共免疫沉淀及表面等离子体共振(SPR)实验,以绘制Gβγ复合物与下游效应蛋白或调节蛋白之间的相互作用图谱。
- 生化重建:重组GNG11适用于异三聚体G蛋白复合物的体外重建,在限定条件下研究其组装、激活动力学和效应蛋白调控。
- GPCR信号研究:作为Gβγ信号轴的组成部分,GNG11蛋白支持GPCR通路激活机制研究,包括腺苷酸环化酶调控和磷脂酶C激活研究。
- 药物发现与靶点验证:GNG11可作为工具蛋白用于筛选调控Gβγ信号的化合物,这是一个新兴的药理学靶点领域。
- 结构生物学:重组GNG11可作为G蛋白复合物结构研究(如冷冻电镜、X射线晶体学)的组成部分。
实验方案指导
以下通用指南有助于在实验室实验中成功使用重组人GNG11蛋白:
- 复溶:若以冻干形式提供,按产品说明书推荐缓冲液复溶蛋白。复溶后短暂离心去除不溶性物质。分装成小份以避免反复冻融。
- 工作浓度:最佳工作浓度因实验类型而异。通过滴定实验确定适合您特定应用的浓度。参考已发表的Gβγ亚基实验文献获取起始浓度参考。
- 相容性:验证缓冲液与实验试剂的相容性。蛋白配方中存在的还原剂(如DTT)和去垢剂可能干扰某些实验格式,如ELISA或AlphaScreen。
- 对照:在所有实验中设置适当的阳性和阴性对照。在可行情况下,使用经验证的Gβγ复合物或已知互作伴侣作为阳性对照。
- 操作:在冰上操作重组蛋白。使用洁净无菌的实验器具并在适当情况下添加蛋白酶抑制剂,以减少蛋白酶污染。
常见问题
GNG11蛋白在人类细胞中的功能是什么?
GNG11编码异三聚体G蛋白的γ-11亚基。与Gβ亚基共同形成Gβγ二聚体,通过与腺苷酸环化酶、磷脂酶C和离子通道等效应蛋白相互作用,在激活的GPCR下游细胞内信号传导中发挥关键作用。同时,通过异戊二烯化修饰实现G蛋白复合物的膜锚定。
重组人GNG11蛋白(rp368014)适合哪些实验应用?
重组人GNG11蛋白适用于蛋白质-蛋白质相互作用研究(pull-down、共免疫沉淀、SPR)、G蛋白复合物的体外生化重建、GPCR信号通路研究、药物发现筛选及结构生物学应用。请查阅产品说明书并进行优化实验,以确认其适用于您的特定实验。
如何储存和操作重组人GNG11蛋白以维持其活性?
按产品说明书规定的条件储存蛋白,通常长期储存于-20°C或-80°C。首次解冻时分装成单次用量小份,避免反复冻融。实验过程中在冰上操作蛋白,并在适用情况下使用蛋白酶抑制剂以防止降解。
表达系统的选择是否影响重组GNG11蛋白的功能?
是的,表达系统会显著影响GNG11的翻译后修饰,尤其是C末端CaaX基序的异戊二烯化修饰,这对天然膜锚定和某些蛋白相互作用至关重要。细菌表达系统可能缺乏进行此类修饰的机制,而昆虫或哺乳动物系统通常更能引入相关脂质修饰。研究人员应核实产品说明书中的表达系统详情及相关功能验证数据。
参考文献
- Oldham WM, Hamm HE. Heterotrimeric G protein activation by G-protein-coupled receptors. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2008;9(1):60-71. doi:10.1038/nrm2299
- Smrcka AV. G protein βγ subunits: central mediators of G protein-coupled receptor signaling. Cellular and Molecular Life Sciences. 2008;65(14):2191-2214. doi:10.1007/s00018-008-8006-x
- Hurowitz EH, et al. Genomic characterization of the human heterotrimeric G protein alpha, beta, and gamma subunit genes. DNA Research. 2000;7(2):111-120.
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