L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素):常见问题解答指南
L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素):常见问题解答指南
L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素)是一种荧光底物,其L-天冬氨酸的β-羧基与7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)偶联,经酶促水解后释放出强荧光的AMC基团,从而实现对天冬氨酰蛋白酶及相关酶活性的灵敏定量检测。
- 产品名称
- L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素)
- 货号
- L431921
- 交叉参考编号
- Sigma-Aldrich A1057
- 底物类别
- 荧光AMC偶联氨基酸底物
- 释放荧光团
- 7-氨基-4-甲基香豆素(AMC);激发波长约380 nm,发射波长约460 nm
- 主要应用
- 天冬氨酰蛋白酶及相关酰胺酶的酶活性检测
L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素)是什么?
L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素)是一种合成荧光底物,专为蛋白酶和酰胺酶活性的检测与定量而设计。该化合物由L-天冬氨酸通过其β-羧基与荧光报告分子7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)连接而成。
底物在完整状态下荧光极弱。经酶促水解酰胺键后,游离AMC得以释放。AMC的激发波长约为380 nm,发射波长约为460 nm,荧光强烈,可提供灵敏、连续的酶活性读数。Aladdin本产品(货号:L431921)对应Sigma-Aldrich广泛引用的目录编号A1057,便于与已发表方案进行直接交叉核对。
该底物应如何储存与操作?
正确的储存与操作对于维持底物完整性和检测重现性至关重要。以下通用指南适用于此类AMC偶联荧光底物:
- 温度:于-20 °C密封避光、防潮储存。建议分装为单次使用的小份,避免反复冻融。
- 光敏性:含AMC的化合物对光敏感,操作时应在弱光环境下进行,避免长时间暴露于环境光中。
- 溶解性:通常将化合物溶于二甲基亚砜(DMSO)配制高浓度储备液(如10–50 mM),使用前立即稀释至水性检测缓冲液中,以减少水解和沉淀。
- 稳定性:DMSO中的储备液在-20 °C正确储存条件下通常可稳定数月。水性工作液应即配即用。
注意:L431921的具体溶解度数据及确认的储存条件,应以随批次提供的质量检验报告(CoA)为准。
该产品的主要研究应用有哪些?
L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素)可用于多种生化和细胞生物学工作流程:
- 蛋白酶活性检测:该底物用于测定天冬氨酰蛋白酶及其他能够水解β-天冬氨酰酰胺键的酶的水解活性,可进行动力学表征(Km、Vmax、kcat)及抑制剂筛选。
- 酶抑制剂谱分析:可在微孔板格式下进行竞争性或荧光法抑制实验,支持候选抑制剂的高通量筛选。
- 酶制剂的质量控制:该底物可在下游实验前对酶批次活性进行快速、灵敏的检测。
- 机制研究:研究人员通过比较结构相关底物的切割速率,利用AMC偶联底物探究蛋白酶的特异性决定因素。
荧光检测格式兼容配备紫外/紫色光源和460 nm发射滤光片的标准微孔板读板仪,使该底物适用于大多数生化实验室。
如何订购及交叉核对该产品?
L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素)可通过Aladdin Scientific以货号L431921订购。该产品对应Sigma-Aldrich目录编号A1057,研究人员可直接交叉核对引用Sigma来源的现有文献方案,无需重新验证。
订购步骤:
- 在Aladdin Scientific官网搜索货号L431921,或联系当地Aladdin销售代表。
- 与销售联系人或通过产品页面质量检验报告确认所需包装规格和纯度等级。
- 如需机构采购或批量采购,请联系Aladdin采购团队获取批量价格和交货期信息。
如有关于检测方案设置、兼容性或规格详情的技术问题,请联系Aladdin Scientific技术支持,并提供货号L431921及批号以便快速处理。
常见问题
L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素)可用于检测哪些酶类?
该底物主要用于检测水解β-天冬氨酰酰胺键的酶,包括天冬氨酰蛋白酶及相关酰胺酶。通过荧光法持续监测水解后游离AMC的释放,可灵敏、连续地反映酶活性。
配制该底物储备液推荐使用哪种溶剂?
二甲基亚砜(DMSO)是配制AMC偶联底物高浓度储备液的常用推荐溶剂,具有良好的溶解性和化学稳定性。储备液应分装后在-20 °C避光保存,使用前立即稀释至水性检测缓冲液中。研究人员应参阅批次特定质量检验报告核实溶解度数据。
Aladdin的L431921与Sigma-Aldrich目录编号A1057有何关联?
Aladdin Scientific的L431921与Sigma-Aldrich目录中编号为A1057的化合物为同一物质。该交叉参考编号允许研究人员直接将引用A1057的已发表方案应用于Aladdin产品,无需修改。请务必通过比较各批次质量检验报告的规格参数来确认等同性。
在酶标仪中应使用哪些荧光检测参数?
检测释放的AMC时,激发波长设置约为380 nm,发射波长设置约为460 nm。这是AMC类底物广泛使用的标准参数。根据所用仪器的滤光片组合,可能需要略微调整。在运行实验样品前,建议先用游离AMC标准曲线确认最佳检测参数。
如何安全操作和处置该化合物?
操作L-天冬氨酸β-(7-氨基-4-甲基香豆素)时,应遵循合成有机化合物的标准实验室安全规程。佩戴适当的个人防护装备,包括手套、实验服和护目镜。按照所在机构的化学废物法规处置废弃物。有关具体危害分类和处置指导,请查阅L431921的安全数据表(SDS)。
参考文献
- Sigma-Aldrich Product Page for L-Aspartic acid β-(7-amido-4-methylcoumarin), catalog number A1057. Merck KGaA, Darmstadt, Germany.
- Zimmerman, M. et al. Fluorogenic substrates for enzymes: use of 7-amino-4-methylcoumarin derivatives. General methodology for assay of peptidases. Analytical Biochemistry, 1976.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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