实验方案（Protocols）

Edoxaban Tosylate一水合物：操作与检测实验方案

· · 发布于 2026年11月10日 · 更新于 2026年11月10日 ·

Edoxaban tosylate Monohydrate是一种强效、选择性口服Xa因子（FXa）抑制剂，被广泛用作研究工具化合物，用于体外及体内抗凝机制和血栓栓塞性疾病模型的研究。

化学名称: Edoxaban甲苯磺酸盐一水合物（N-(5-氯-2-吡啶基)-2-[[4-[(二甲氨基)亚氨甲基]苯甲酰基]氨基]-5-甲氧基苯甲酰胺对甲苯磺酸盐一水合物）
主要靶点: Xa因子（FXa）——直接、选择性抑制剂
推荐储存条件: 于-20°C避光防潮保存；妥善保存条件下稳定期≥2年
溶解度: 可溶于DMSO（≥10 mM）及水；在乙醇中溶解度有限
纯度: ≥98%（HPLC）
研究应用: 体外FXa活性检测、抗凝药理学研究、血栓模型

材料与安全注意事项

在开始使用Edoxaban tosylate一水合物（货号：E172755）之前，请准备以下材料并查阅所有相关安全信息：

化合物：Edoxaban tosylate一水合物（E172755，Aladdin Scientific）
溶剂：无水DMSO（细胞培养级）、无菌磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）或超纯水
设备：分析天平（读数精度0.01 mg）、涡旋混合仪、台式微量离心机、0.22 µm注射式过滤器（PVDF）、棕色微量离心管
个人防护装备：实验室防护服、丁腈手套及护目镜，全程佩戴

安全注意事项：Edoxaban tosylate一水合物为药理活性抗凝剂，避免吸入粉尘或气溶胶。使用前请查阅安全数据表（SDS）。作为科研试剂，仅供体外及体内实验室研究使用，不得用于人体治疗。操作DMSO时需格外小心，因其易渗透皮肤，可能携带溶解化合物经皮肤吸收。

储备液配制

请按照以下步骤配制高质量的Edoxaban tosylate一水合物储备液：

平衡样品瓶温度：开封前，将密封样品瓶在室温下平衡约15–20分钟，防止粉末受潮。
计算所需体积：确定达到目标储备浓度（通常为10–50 mM）所需的溶剂体积。计算公式：体积（mL）= 质量（mg）/ [分子量（g/mol）× 目标浓度（mM）× 10^-3]。Edoxaban tosylate一水合物的分子量约为738.22 g/mol。
溶于DMSO：将计算量的无水DMSO直接加入样品瓶。涡旋1–2分钟，如需要可在水浴中超声（25°C，5–10分钟）以确保完全溶解。溶液应呈澄清无色至淡黄色。
可选水性稀释：如需水性工作液，可将DMSO储备液稀释入PBS或培养基。细胞实验中最终DMSO浓度应≤0.1%（v/v），以避免细胞毒性干扰。若出现沉淀，可在37°C下轻柔加热并涡旋溶解。
过滤除菌：若细胞实验需无菌，使用0.22 µm PVDF注射式过滤器过滤。
分装储存：分装至一次性棕色微量离心管中。DMSO储备液在-20°C可保存至6个月，长期储存建议-80°C。避免反复冻融。

注意：每次实验当天应从冷冻分装液新鲜配制工作稀释液。

体外Xa因子抑制活性检测

本荧光或显色法检测方案用于测定Edoxaban tosylate一水合物对纯化人Xa因子（FXa）酶活性的抑制能力。

所需试剂

纯化人Xa因子（商业来源）
荧光底物（如Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC）或显色底物（如S-2222）
检测缓冲液：50 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、5 mM CaCl₂、0.1% BSA，pH 7.4
96孔黑色平底微孔板（荧光法）或透明微孔板（显色法）
配备相应滤光片的微孔板读数仪

操作步骤

配制化合物稀释梯度：从DMSO储备液起，在检测缓冲液中配制Edoxaban tosylate一水合物的10点系列稀释（如最终浓度范围0.1 nM – 1 µM）。所有孔中DMSO浓度维持≤0.1%（v/v）。
预孵育：向每孔加入10 µL化合物溶液（或溶剂对照），随后加入40 µL FXa溶液（最终酶浓度按验证后的检测条件确定）。于37°C孵育15分钟，使化合物与酶充分平衡。
启动反应：加入50 µL荧光或显色底物（浓度为预设Km值），启动酶促反应。轻柔振荡微孔板混匀30秒。
读取信号：荧光底物：在37°C条件下，以动力学模式监测荧光强度（激发/发射波长 = 380/460 nm），持续30–60分钟。显色底物：在405 nm处读取吸光度。
计算抑制率：以溶剂对照孔为基准计算抑制百分率。将浓度-响应数据拟合四参数逻辑斯谛（4PL）曲线，求得IC₅₀值。

对照设置：需包括（a）酶+底物无化合物（最大活性对照）、（b）仅底物无酶（本底对照）及（c）已知FXa抑制剂参考标准品（用于检测体系验证）。

故障排除

以下指导可帮助解决使用Edoxaban tosylate一水合物时常见的问题：

问题现象	可能原因	建议解决方案
化合物未完全溶解	涡旋不充分或温度过低	短暂加热至37°C后重新涡旋；超声5–10分钟；确保DMSO为无水级
水性介质中出现沉淀	超过溶解度极限或快速稀释至冷缓冲液	降低化合物终浓度；稀释前将缓冲液预热至37°C；逐步降低DMSO浓度
FXa抑制信号低或不稳定	酶活性丧失或底物浓度不在线性范围内	使用阳性对照验证酶活性；确认底物在线性范围内；检查缓冲液pH及CaCl₂浓度
本底荧光偏高	DMSO浓度过高或化合物自身荧光	保持DMSO≤0.1%（v/v）；不加底物测定化合物荧光值以扣除本底
IC₅₀值重复性差	反复冻融导致降解或预孵育时间不一致	使用单次分装液；标准化所有孵育时间；每块板均设参考抑制剂对照

常见问题

配制Edoxaban tosylate一水合物储备液最适合使用哪种溶剂？

无水DMSO是推荐的首选溶剂，通常可配制10–50 mM的储备液。对于水性体系，应将DMSO储备液稀释入PBS或培养基，最终DMSO浓度应维持在≤0.1%（v/v）。若需较低浓度水性储备液，也可直接用水溶解。

Edoxaban tosylate一水合物应如何储存以保持稳定性？

固体化合物应在避光、干燥环境中于-20°C保存。配制好的DMSO储备液应分装至一次性棕色离心管中，于-20°C保存（最长6个月），长期保存建议-80°C。应避免反复冻融，以防加速降解。

使用本化合物进行FXa抑制活性检测时，适合的浓度范围是多少？

测定IC₅₀时，通常采用覆盖约0.1 nM至1 µM终浓度范围的10点系列稀释。具体范围可能需要根据酶来源、检测缓冲液条件和底物浓度进行调整。每块检测板均应设置溶剂对照和参考抑制剂对照。

Edoxaban tosylate一水合物是否适用于基于细胞的抗凝研究？

是的，Edoxaban tosylate一水合物可用于检测FXa依赖性信号传导或凝血终点的细胞实验。需确保最终DMSO浓度不超过0.1%（v/v），以避免细胞毒性。在开展药理学研究前，应先进行仅溶剂的细胞毒性对照实验。

Aladdin的E172755产品达到哪些质量标准？

Aladdin的Edoxaban tosylate一水合物（货号：E172755）经HPLC检测纯度≥98%。每批次均附有检验合格证书（CoA），验证化合物的鉴别、纯度和外观。该产品仅供科学研究使用，不适用于临床或治疗目的。

参考文献

Furugohri T, et al. DU-176b, a potent and orally active factor Xa inhibitor: in vitro and in vivo pharmacological profiles. J Thromb Haemost. 2008;6(9):1542–1549.
Hokusai-VTE Investigators. Edoxaban versus Warfarin for the Treatment of Symptomatic Venous Thromboembolism. N Engl J Med. 2013;369(15):1406–1415.
Giugliano RP, et al. Edoxaban versus Warfarin in Patients with Atrial Fibrillation. N Engl J Med. 2013;369(22):2093–2104.

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

目录：实验方案（Protocols）

探索主题：抗凝剂小分子工具化合物 Xa因子抑制剂储备液配制规程体外检测

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。