乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus,HBV) 感染引起的慢性乙型肝炎 (chronie hepatitis B,CHB) 以及相关的肝硬化 (liver cirrhosis , L.C)。肝细胞癌 (hepatocellular earcinoma ,HCC) 和肝衰竭是全球范围内重要的医学和公其卫生问题。乙肝病毒具有种属特异性和组织特异性, 可以通过各种体液排至体外，如，血液、精液、阴道分泌物、唾液、乳汁、月经、泪液、尿液、汗液等。目前，乙型肝炎动物模型 (animal models of hepatitis Bvirus infection) 有非人灵长类动物、转基因小鼠、转染小鼠及免疫缺陷嵌合肝小鼠模型。

原理

建立在经典遗传学、分子遗传学、 结构遗传学和 DNA 重组技术的基础之上， 用导入的方法使外源基因在动物染色体基因组内稳定整合，并能遗传给后代的一类动物。

从小鼠尾静脉快速注射大剂量转染的目的基因，使目的基因在小鼠肝脏获得高水平表达，利用腺相关病毒有高嗜肝性，将 HBV 基因组转导入小鼠肝组织，HBV 在小鼠体内表达。

人肝嵌合小鼠模型是将人的肝细胞移植到免疫缺陷小鼠体内，正常的人肝细胞可以在小鼠体内持续生长，因此可感染人 HBV。

非人灵长类动物与人的生理生化功能和基因组等具有相似性。

DHBV 与 HBV 同属于嗜肝 DNA 病毒科，两者核苷酸序列同源性为 40%。对 DHBV 的易感性与鸭的自身免疫力有关，1~3 日龄雏鸭免疫系统发有不完善， 对 DHBV 易感染，可产生高水平的慢性携带病毒状态。

应用

适合于从分子水平研究 HBV 复制过程。临床前评价抗病毒药物, 研究药物的药效、药动学以及毒理，也可用作评价免疫治疗的疗效。HBV 全基因组转基因动物可用于研究 HBV 感染时的病毒清除机制和免疫损伤机制。HBV 特异基因组转基因动物可用于 HBV 特异基因功能研究、HBV 成热的免疫调节天然免疫的作用及药物和疫苗评价、研究 HBV 感染机制, 评价抗病毒药物药效学和评估治疗性疫苗。不能作为机体和病毒相互作用特别是免疫清除机制的研究。可用于研究 HBV 感染机制和机体免疫清除病毒机制，而且可作为抗 HBV 新药药效学评价的模型。适合进行 HBV 的生物特性，致病机制和抗 HBV 药物评价研究。

操作方法

非人灵长类动物模型

原理

非人灵长类动物与人的生理、生化功能和基因组等具有相似性。

材料与仪器

器材：黑猩猩、长臂猿、恒河猴雄性、熊猴、树朐

步骤

非人灵长类动物模型的基本过程可分为如下几步：
A. 黑猩猩：静脉注射黑猩猩 1 ml 含乙型肝炎病毒 ayw 1undefined 或 adw 10 或 adr ≥ 1undefined 或 ayr ≥ 10° 感染剂 i CID) 的血清; 静脉注射含有 HBsAg 阳性的人的唾液和精液 ( Alter); 皮下接种克隆的 HBV DNA(Will H.1982)；乙肝病毒人血浆滴入黑猩猩角膜表面，9 周后动物出现 HBV 感染 (Band， 1982)。乙肝表面抗原阳性患者的精液注人黑猩猩阴道内。
B. 长臂猿：HBsAg(+)，HBeAg(+) 携带者精液, 滴度 1:1000 以上。呼吸道感染，每天皮下注射 2.5 ml, 连续 2 天, 总量 5 ml；气溶胶感染，每天 2.5 ml，总量 5 ml；刷牙后口服，剂量同上 (刷牙时必须使牙床出血)。精液接种，皮下注射. 每天 0.6 ml，总量 1.2 ml；或阴道内接种，每天 1.2 ml，总量 3.6 ml；或用导尿管将精液送入阴道深部，并用指套刺激阴道，使阴道黏膜受损，分泌物带血色。
C. 恒河猴：雄性，体重 2 kg，1~2 岁，HAV，HBV，HCV 阴性。接种 HBV 前先用 1~2 Cy 剂量 ⁶⁰C_o 全身照射, 猴体内 WBC 小于 4 x 10⁹/L，然后，一次性静脉注射人 HBV 阳性血清 2 ml。
D. 熊猴：体重 0.8~4 kg, 年龄 0.5~3 岁,HBV 标志物阴性。新鲜急慢性乙型肝炎患者血清或冻存 2 年的慢性乙型肝炎患者血清 1 ml 经静脉或腹腔注射；HBV 阳性血清 (3~5 ml/kg) 一次静脉注射。

E. 树朐：选用 HBeAg 阳性、HBsAg 阳性、HBcAb 阳性、HBV DNA 拷贝数在 10⁷ copies/ml 以上的 HBV 感染者的血清作为感染源。1~30 日龄的幼年树嗣经肌注或腹腔注射, 每只约 300 ul，约含 3 x 10⁶ HBV DNA copies/ml；31 日龄至 4 月龄的树嗣采取股静脉注射, 每只约 500 ul 血消, 约含 5 × 10⁶ HBV DNA copies/ml：成年树蓟首次静脉注射 500 ul 血清,3 天后, 经腹腔注射 500 ul 相同血清。

B. 细菌接种前第 4 天和第 3 天腹膜内注射环磷酰胺 (150 mg/kg)。

注意事项

1. 黑猩猩是目前唯一 HBV 自然感染动物模型。但价格昂贵，难以推广。

2. 长臂微可产生明显的血清酌学和肝组织学改变。

3. 恒河猴对感染的 HBV 材料有所选择。感染后，HBsAg 水平低、无生化及肝组织病变。

4. 熊猴 HBV 感染后，肝内能检测到 HBsAg，但信号弱，肝细胞及血清中 HBV DNA 滴度低甚至不能检测。

5. 树 HBV 感染树酶后，属于一种急性自限性感染。

90% 呈急性感染，肝组织中有 HBV DNA 的表达，血液中出现了 HBsAg，接着产生了 HBsAb、HBeAb、HBcAb , 病毒很快就被清除。

56% 可持续 1 年以上慢性感染，33% 可持续两年以上，肝细胞中 HBsAg 阳性率 80%。

如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com