条件 1：碱（TEA、DIPEA、Py 等）；DCM 或 DMF
条件 2： PBS 缓冲液，pH7.4-9。

简介
        PEG NHS 酯是一类具有特定长度 PEG 间隔的胺反应试剂。这种试剂可溶于 DMSO 或 DMF 等有机溶剂。在有机溶剂中溶解后，该试剂可在不含胺的水性缓冲液中进一步稀释。PEG NHS 酯可与中性或微碱性缓冲液中的伯氨基 (-NH2) 有效反应，形成稳定的酰胺键。由于抗体和其他蛋白质除了每个多肽的 N 端外通常还含有多个赖氨酸 (K) 残基，因此它们有多个伯氨基可作为 NHS 激活的 PEG 试剂的标记目标。

产品信息

        • PEG NHS 酯对湿度敏感。请将小瓶试剂与干燥剂一起保存在 -20°C 温度下。为避免湿气凝结在产品上，开瓶前应将小瓶平衡至室温。

        • 使用前立即溶解 PEG NHS 酯。NHS 酯分子很容易水解并失去活性；因此，每次只需称量并溶解少量试剂，不要配制储备溶液储存。丢弃任何未使用的重组试剂。

        • 避免使用含有伯胺（如 Tris 或甘氨酸）的缓冲液，因为这些缓冲液会与预期反应发生竞争。如有必要，可透析或以其他方式脱盐，将蛋白质样品置换到不含胺的缓冲液（如磷酸盐缓冲液）中。

所需其他材料

        • 磷酸盐缓冲液（PBS）： 0.1M 磷酸盐、0.15M 氯化钠；pH 值为 7.2 或 pH 值为 7.0-8.0 的其他不含胺缓冲液

        • 淬火缓冲液： 三相缓冲盐水 (TBS)：25mM Tris、0.15M 氯化钠；pH 值 7.2；甘氨酸或其他含胺缓冲液

        • 水溶性有机溶剂，如二甲基亚砜（DMSO）或二甲基甲酰胺（DMF）

        • 10-100µL 样品体积；Slide-A-Lyzer® 透析盒套件，用于 0.1-30.0mL 样品体积；或 Zeba 自旋脱盐柱，用于 >10µL 至 4mL 样品体积。

用 PEG NHS 酯修饰含小分子胺的步骤 
        将含胺小分子缓慢溶解于无水有机溶剂中，如 DMF、CH2Cl2、DMSO、THF 或其他所需的溶剂。在持续搅拌下，根据反应动力学，将碱和 PEG NHS 酯按 1:1 或 2:1 的摩尔当量加入上述反应混合物中。根据底物的性质，将反应混合物搅拌 3-24 小时，并通过 LC-MS 或 TLC 板进行监测。最终产物可通过一般的有机合成步骤或柱纯化分离出来。

用 PEG NHS 酯标记 IgG 的步骤 
 A. 计算
        PEG 连接剂的标记程度取决于蛋白质上氨基的大小和分布以及所用试剂的量。与使用浓缩蛋白质溶液的反应相比，使用稀释蛋白质溶液的标记反应需要更大倍数摩尔过量的 PEG NHS 酯连接体才能达到相同的结合水平。通常情况下，使用摩尔过量 20 倍的 PEG NHS 酯连接剂标记 1-10mg/mL 的抗体（IgG），每个抗体分子可标记 4-6 个连接剂。调整 NHS-(PEG)n 与蛋白质的摩尔比，以获得所需的结合水平。

        1. 计算在摩尔过量 20 倍的情况下，需要添加到反应中的 PEG NHS 酯的毫摩尔数。
        2. 计算加入到反应中的 10mM PEG NHS 酯制剂的微升数。

B. PEG NHS 酯标记反应
        对于 10µL 至 100µL 的反应体积，可在一个 Slide-A-Lyzer MINI 透析装置中方便地进行缓冲液交换和 PEG 化反应。对于 0.1mL 至 30mL 的反应容量，可使用 Slide-A-Lyzer 透析盒。此外，还可使用 Zeba Spin 脱盐柱加快缓冲液交换速度。

        1. 在步骤 3 中打开 PEG NHS 酯瓶之前，将其平衡至室温。
        2. 根据计算结果，将 1-10mg 蛋白溶解在 0.5-2mL PBS 中。

        3. 使用前，在 1mL DMSO 或 DMF 中加入约 5mg PEG NHS 酯，制备 10mM 的 PEG NHS 酯溶液。
        4. 向蛋白质溶液中加入适量的 PEG NHS 酯溶液（摩尔过量 20 倍），确保有机溶剂的体积不超过最终反应体积的 10%。
        5. 将反应在冰上孵育两小时或在室温下孵育 30-60 分钟。
        6. 通过透析或凝胶过滤去除未反应的 PEG NHS 酯。
        7. 按照非 PEG 化蛋白质的最佳条件储存 PEG 化蛋白质。

阿拉丁官网：https://www.aladdin-e.com