条件 1：DMF 或 DCM；基质
条件 2：PBS 缓冲液 pH 7.2 至 8.5

简介
        PEG PFP 酯是一类 PEG 标记试剂，可与伯胺和仲胺发生反应形成酰胺键。与 NHS 酯相比，五氟苯基 (PFP) 酯不易水解，因此反应效率更高。PEG PFP 酯首先必须溶解在极少量的有机溶剂中，如二甲基亚砜（DMSO）或二甲基甲酰胺（DMF），然后加入含有蛋白质或其他分子的缓冲液中。试剂形成乳液，使反应得以进行。

产品信息
        • PEG PFP 酯对湿气敏感。请将试剂瓶与干燥剂一起保存在 -20°C 温度下。为避免湿气凝结在产品上，打开试剂瓶前应将其平衡至室温。
        • 按照操作步骤的指示，在使用前立即溶解 PEG PFP 酯试剂。PFP 分子很容易水解，变得没有反应性；因此，每次只需称量和溶解少量试剂，不要配制储存溶液。丢弃任何未使用的重组试剂。
        • 避免使用含有伯胺的缓冲液（如 Tris 或甘氨酸），因为它们会与反应发生竞争。如有必要，可透析或脱盐，将蛋白质样品换入不含胺的缓冲液（如磷酸盐缓冲盐水 (PBS)）中。
        • 在 PEG 化过程中，使用脱盐柱或透析进行尺寸排除，可轻松去除未反应的连接体。10mL 脱盐柱最适合处理约 0.5-2mL 中含有 1-10 毫克蛋白质的 PEG 化反应。对于较少量的蛋白质和/或较小的反应体积，可在一个 Thermo Scientific Slide-A-Lyzer MINI 透析装置中进行 PEG 化反应和随后的缓冲液交换。

用 PEG NHS 酯对含胺小分子进行改性的步骤
        将含胺小分子缓慢溶解在无水有机溶剂中，如 DMF、CH2Cl2、DMSO、THF 或其他需要的溶剂。在持续搅拌下，根据反应动力学，将碱和 PEG NHS 酯按 1:1 或 2:1 的摩尔当量加入上述反应混合物中。根据底物的性质，将反应混合物搅拌 3-24 小时，并通过 LC-MS 或 TLC 板进行监测。最终产物可通过一般有机合成步骤或柱纯化分离出来。

IgG 和其他蛋白质 PEG 化的一般步骤
所需材料
        • 磷酸盐缓冲液 (PBS)： 0.1M 磷酸盐，0.15M 氯化钠；pH 值为 7.2 或 pH 值为 7.0-8.0 的其他不含胺的缓冲液
        • 淬灭缓冲液： 三相缓冲盐水（TBS；25mM Tris，0.15M 氯化钠；pH 7.2；甘氨酸或其他含胺缓冲液）
        • 水溶性有机溶剂，如二甲基亚砜（DMSO）或二甲基甲酰胺（DMF）
        • 10-100µL 样品容量；Slide-A-Lyzer® 透析盒套件，适用于 0.1-30.0mL 样品容量；或 Zeba 自旋脱盐柱，适用于 >10µL 至 4mL 样品容量。

方案 
        以下方案通常可使每个 IgG 产生约 2 到 5 个 PEG 分子。PEG 连接物的结合程度会因 PEG 化反应的参数（包括蛋白质浓度、PEG PFP 酯浓度、pH 值和时间）而有所不同。常用的反应条件包括培养温度为 4-37°C，pH 值为 7-9，培养时间从几分钟到过夜不等。

        1. 将 2 毫克 IgG 溶解在 1 毫升 PBS（例如 0.1M 磷酸钠，0.15M NaCl，pH 7.2）中。
        2. 使用前，立即将 1mg PEG PFP 酯溶解于 75µL DMF 或 DMSO 中。在 IgG 溶液中加入 25µL PFP-PEG 溶液。

        3. 在室温下将反应置于冰上孵育 2 小时或 37°C 孵育 30 分钟。
        4. 通过透析或凝胶过滤去除未反应的 PEG PFP 酯。

        5. 将 PEG 化蛋白按照非 PEG 化蛋白的相同条件保存，直至准备使用。

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