LNP RNA Transfection Reagent (Primary Immune Cells)

货号: L1375585
有货
级别和纯度: BioReagent ? 生物试剂级(BioReagent)—— 经测试适用于生命科学和分子生物学。适用于需要生物相容性的细胞培养、检测和生化工作。 分子生物学级 ? 适用于分子生物学 —— 不含降解 DNA/RNA 的核酸酶和污染物。适用于克隆、PCR 和需要洁净试剂的核酸工作。 无菌 ? 无菌级 —— 经处理并验证无活微生物。可直接用于无菌操作和细胞培养,无需再灭菌。
别名
LNP RNA 转染试剂(原代免疫细胞)
储存条件
2-8°C储存,禁止冷冻
运输条件
低温运输,禁止冷冻
应用
Cell Transfection
★
规格
库存
价格
数量
1.5ml
L1375585-1.5ml
期货 Stock Image
¥4,899.90
3ml
L1375585-3ml
期货 Stock Image
¥8,799.90
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为什么选择此级别

BioReagent,分子生物学级,无菌 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

2-8°C储存,禁止冷冻。低温运输,禁止冷冻 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

LNP 原代免疫细胞 RNA 转染试剂盒是基于脂质纳米粒(LNP)技术研发的专门针对原代免疫细胞的新型即用型转染试剂,利用 LNP 独特的跨膜转运和内体逃逸机制,实现对 RNA 高效递送,适用于不同类型 RNA 在原代免疫细胞的体外转染。

易用:无需特定包封设备,一步混合即可实现 RNA-LNP 瞬时包封,无需孵育。

高效:微量样品的包封率可达 80%以上,实现对原代免疫细胞高效转染。

安全:本品采用新型生物可降解脂质材料,细胞毒性极低,且经 0.2μm 微孔滤膜过滤。

产品组分表

半成品项目号

Component

1.5 ml

3.0 ml

Storage

L1375585A

LNP原代免疫细胞RNA转染试剂

1.5 ml

3.0 ml

2-8℃

L1375585B

Buffer

8mL

8mL

2-8℃

L1375585C

转染增强剂

70μg

2×70μg

2-8℃

运输与保存方法

受控常温(≤25℃)运输。2℃~8℃保存。不得冷冻!

适用范围

LNP原代免疫细胞 RNA 转染试剂盒适用于人或鼠原代免疫细胞的 RNA 转染,其中 RNA 类型包括siRNA、miRNA、gRNA 和 mRNA 等。

本产品仅供研究使用。

注意事项

(1)转染增强剂为冻干粉,开盖前请先离心,用 1×PBS 溶液制备成浓度 1μg/μL 的转染增强剂溶液,复溶后不得涡旋,根据使用需求进行分装,避免反复冻融。转染增强剂溶液-20℃可保存 3 个月, 2-8℃可储存 1 周。

如每孔转染增强剂用量较低,可在临用前将上述转染增强剂储存液用 1×PBS 溶液稀释至 0.1μg/μL,再加入细胞。

(2)RNA 原液的最佳溶剂为无酶水,且 mRNA 浓度不低于 200ng/μL、siRNA 浓度不低于 10μM,其他类型的溶剂对转染效果可能会有一定影响,具体情况可以联系我们。

(3)制备 RNA 预混液请确保使用试剂盒专用 Buffer 稀释 RNA 原液,不得使用 PBS 或培养基。

(4)请确保 RNA 预混液浓度为 40ng/μL。若多种 RNA 共转染,如 CRISPR Cas9 mRNA 与 gRNA 共转染,则 RNA 预混液浓度为 Cas9 mRNA + gRNA 的总浓度,Cas9 mRNA 与 gRNA 的推荐用量比为 1:1~1:2(μgmRNA:μggRNA)。

(5)RNA/LNP 的比例是 LNP 包封的关键因素,如需增减每孔用量,请按附录 A 和附录 B 项下注意事项进行调整。

(6)RNA-LNP 复合物在室温条件下可稳定存放 8 小时,请勿将 RNA-LNP 复合物置于冷冻条件。

(7)转染前后均无需更换细胞培养基,含有血清、双抗的完全培养基对转染效果无明显影响;转染 6h 以后可按细胞常规培养流程,进行换液或其他操作。


附录 A:原代免疫细胞 mRNA 转染操作说明

1. LNP原代免疫细胞 RNA 转染试剂盒操作流程

2. 不同培养容器中每孔试剂用量

步骤

试剂

培养容器

 

 

 

 

96 孔板

24 孔板

 6 孔板

1) 40ng/μL mRNA 预混液制备

Buffer(以 mRNA 原液浓度 1μg/μL 为例)

2.4μL

12μL

60μL

 

mRNA

 0.1μg

0.5μg

 2.5μg

2) mRNA-LNP复合物制备

LNP原代免疫细胞 RNA 转染试剂

 2.5μL

 12.5μL

62.5μL

 

mRNA 预混液

2.5μL

12.5μL

 62.5μL

3) 加入细胞

mRNA-LNP复合物

 5μL

 25μL

125μL

 

转染增强剂

0.1μg

0.5μg

2.5μg

3.注意事项

(1) 转染增强剂的使用见正文“5. 注意事项”。

(2) 请确保 mRNA 原液的溶剂为无酶水,且浓度不低于 200ng/μL。

(3) 不得使用 PBS 或培养基稀释 mRNA 原液,请确保稀释得到的 mRNA 预混液浓度为 40ng/μL。

(4) mRNA-LNP复合物在室温条件下可稳定存放 8 小时,请勿将 mRNA-LNP复合物置于冷冻条件。

(5) 请注意 mRNA/LNP 的比例是 LNP 包封的关键因素,如需增减每孔 mRNA 用量,您可以按比例增加或减少加入细胞的每孔 mRNA-LNP复合物和转染增强剂的用量。


附录 B:原代免疫细胞 siRNA 转染操作说明

1. LNP原代免疫细胞 RNA 转染试剂盒操作流程

2. 不同培养容器中每孔试剂用量

步骤

试剂

培养容器

 

 

 

 

96 孔板

24 孔板

6 孔板

1) 3pmol/μL siRNA 预混液制备(即 3μM)

Buffer(以 siRNA 原液浓度 10μM 为例)

0.7μL

3.5μL

 17.5μL

 

siRNA

3pmol

15pmol

75pmol

2) siRNA-LNP复合物制备

LNP原代免疫细胞 RNA 转染试剂

1μL

5μL

25μL

 

siRNA 预混液

1μL

 5μL

25μL

3) 加入细胞

siRNA-LNP复合物

2μL

10μL

50μL

 

转染增强剂

 0.04μg

 0.2μg

1μg

3. 注意事项

(1)转染增强剂的使用见正文“5. 注意事项”。

(2)请确保 siRNA 原液的溶剂为无酶水,且浓度不低于 10μM。

(3)不得使用 PBS 或培养基稀释 siRNA 原液,请确保稀释得到的 siRNA 预混液浓度为 3pmol/μL(即 3μM)。

(4)siRNA-LNP复合物在室温条件下可稳定存放 8 小时,请勿将 siRNA-LNP复合物置于冷冻条件。

(5)请根据 siRNA 用量调整 LNP转染试剂用量。以 96 孔为例,如每孔 siRNA 用量>3pmol,可按比例增加每孔 siRNA-LNP复合物的体积。例如:每孔需加入 6pmol siRNA,仅需取 4μL 上述 siRNA-LNP复合物,和 0.08μg 转染增强剂加入细胞即可。

如每孔 siRNA 用量<3pmol,转染试剂用量应维持在 1μL/孔,仅需对应调整 siRNA 预混液的浓度,其他操作维持不变。例如:每孔需加入 1.5pmol siRNA,仅需调整 siRNA 预混液浓度为 1.5μM 即可。

 

附录 C:人原代 T 细胞活化、扩增参考方案

时间

步骤

详细步骤

说明

Day 0

1. 复苏人原代 T 细胞

1) 在温水浴中快速解冻冻存的人原代 T 细

胞;

2) 将复苏的细胞加入含有 9mL 1640 完全培养

基的离心管中;

3) 以 300×g 离心 5min,弃去上清液,加入

1mL T 细胞无血清培养基(如:

STEMCELLTM)吹打均匀; 4) 转移至 6 孔板中,再加入 4mL T 细胞无血

清培养基混匀; 5) 放入 CO2培养箱中。

1) 可使用直接从外周血分离

的人原代 T 细胞;

2) 建议分离或解冻 T 细胞后

立即活化。

Day 1

2. T 细胞活化、扩增

1) 将 T 细胞吹匀后计数,并将培养基换成 T

细胞无血清培养基+1%双抗+300IU IL-2; 2) 按照细胞数量加入对应比例的 CD3/CD28

磁珠活化;

3) T 细胞扩增时间可根据实验所需细胞数量进

行调整,一般建议 T 细胞活化后 3 天;

4) 细胞培养期间,必要时使用培养基(T 细胞

无血清培养基+1%双抗+300IU IL-2 )进行

补液或半换液。

细胞活化也可使用 T 细胞激活

剂(如:ImmunoCultTM

Human CD3/CD28/CD2 T Cell

Activator)。

Day 4

3. T 细胞表面 CD25

表达水平检测

1) 使用流式细胞仪检测有活力的 T 细胞表面

CD25 表达水平。

2) 当有活力的 T 细胞表面 CD25 表达水平达

到 80%以上,可以进行后续转染实验。

原代 T 细胞转染操作流程

详见附录 A/B


注意事项

(1)原代 T 细胞培养也可使用有血清培养基。

(2)如使用 T 细胞激活剂活化人原代 T 细胞,具体活化方案请参考所用 T 细胞激活剂说明书。

(3)请尽量在细胞活化后一周内完成细胞转染实验。

(4)使用 24 孔板进行时,推荐的细胞密度为 2-5×105cells/孔。

(5)请确保转染前 CD25 表达水平不低于 80%,这对 RNA-LNP复合物成功递送到 T 细胞至关重要。

是否无菌:是


规格

别名
LNP RNA 转染试剂(原代免疫细胞)
规格或纯度
BioReagent, 分子生物学级, 无菌
稳定性与储存
Store at 2-8℃ (18 months). Do not freeze.
英文名称
LNP RNA Transfection Reagent (Primary Immune Cells)
储存条件
2-8°C储存,禁止冷冻
运输条件
低温运输,禁止冷冻
产品线
生物产品
名称和识别符
分子类型
试剂盒

技术文档

📋 安全数据表 (SDS)

全面的危险、操作、储存及法规合规文件。

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✅ 分析证书 (COA)

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📊 产品数据表

产品规格和应用的快速参考摘要。

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🔬 规格说明书

该级别的完整质量属性和验收标准。

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高级数据

质检证书(CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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技术文档和文章
溶液计算器

常见问题

什么是「分子生物学级」?
「分子生物学级」表示该产品经过加工和检测,适用于分子生物学和蛋白质组学。典型规格包括:低或不可检测的核酸酶/蛋白酶活性、低内毒素、受控的微生物限度,以及高批间重现性。
什么是「BioReagent」?
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测,适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性,以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存?
请于2–8 °C条件下保存。请勿冷冻。冷冻可能对本品造成不可逆的损坏。
本产品如何运输?
本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包,并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA?
每个订单都会随附分析证书(COA),您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA,请联系您的客户代表,或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。