BioReagent 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
2-8°C储存。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
产品介绍
钥孔戚血蓝蛋白(mcKLH)是高质量形式的KLH，从海水养殖生长的帽贝中获得，其免疫原性与KLH相似，但作为用于生产抗半抗原抗体的载体蛋白，具有更高的稳定性和效率。每个mcKLH分子可偶联多个抗原分子，以此提升抗原免疫原性，提高免疫动物针对目标表位产生高滴度抗血清的概率，同时mcKLH具有高分子质量（ 4.5×10⁵至 1.3×10⁷ 道尔顿；350和 390 kDa 亚基聚集体），可引发比BSA或OVA更强的免疫应答。因此常作为载体蛋白，与半抗原、弱免疫原偶联，用于动物免疫制备特异性抗体。
马来酰亚胺活化mcKLH偶联试剂盒采用简便快捷的流程，实现含巯基半抗原与载体蛋白mcKLH的偶联。该载体蛋白经过活化，暴露出可用于反应的马来酰亚胺基团，与含巯基的半抗原反应，偶联物可用于动物免疫制备特异性抗体。试剂盒提供马来酰亚胺活化的血蓝蛋白(SMCC-mcKLH)、偶联所需的所有试剂、纯化填料和离心柱管，以及详细的分步操作指南。本试剂盒包含两种规格，可支持1次或5次独立偶联反应。
图1 马来酰亚胺活化mcKLH偶联试剂盒 (M1509078)偶联原理图
产品组份
| M1509078 | 组分 | 物理外观 | 1 reaction | 5 reactions | 储存温度 | 每次反应用量 |
| M1509078A | SMCC Activated mcKLH | 冻干粉 | 2 mg | 5×2mg | 2-8℃，避光，禁止冷冻 | 2mg SMCC-mcKLH可用于偶联2mg的半抗原 |
| M1509078B | 偶联缓冲液 | 无色透明液体 | 6 mL | 30 mL | 2-8℃ | 请按说明配制 |
| M1509078C | 纯化缓冲液 | 无色透明液体 | 10 mL | 50 mL | 2-8℃ | 请按说明配制 |
| M1509078D | 纯化填料 | 白色微珠混悬液 | 3 mL | 15 mL | 2-8℃，禁止冷冻 | 每次反应需使用3mL |
| M1509078E | 离心柱管 | 透明管体 | 1 EA | 5 EA | 2-8℃ | 每次反应需使用1个 |
其他所需试剂
1. 离心机。
2. 用于标记的半抗原。
3. PBS缓冲液（pH 7.2-7.4）。
重要须知
1. 本方案为通用流程，适用于绝大多数半抗原；需根据半抗原分子量、空间结构优化条件以提升偶联效率。
2. 体系中半抗原摩尔量过量可保证偶联充分；通常半抗原与mcKLH等质量投料即可实现摩尔过量。
3. 反应体系添加过DMSO时，平衡柱子的纯化缓冲液需加入同等比例DMSO，避免脱盐过程蛋白析出。
4. 若偶联反应出现沉淀：离心收集上清单独纯化，沉淀留存；纯化完成后将沉淀与纯化液合并使用。
5. 待纯化反应液体积应控制在0.4-0.7 mL，保证纯化柱的最佳去除效果。
6. 纯化填料建议一次性使用。
7. 在正式实验前，需将试剂恢复至室温，在使用前将试剂进行离心，较低的温度和离心管壁试剂残留均会影响偶联效果；
8. 操作过程中，务必穿戴实验服、一次性手套及防护装备；
9. 所有产品仅限于研究用途。
使用说明
1. 配制SMCC-mcKLH溶液（10 mg/mL）：向SMCC Activated mcKLH中加入200 μL纯水，轻轻摇晃直至全部溶解。
注意：复溶的SMCC Activated mcKLH溶液须现用现配。SMCC-mcKLH形成一种呈半透明至蓝灰色的悬浮液。请勿涡旋振荡或加热该悬浮液，否则会导致载体蛋白沉淀。
2. 制备半抗原溶液（4-10mg/mL）：取2 mg半抗原，加入200-500 μL偶联缓冲液。
注意：部分半抗原水溶性差，可用DMSO助溶，DMSO在终反应体系中占比＜30%；过高浓度DMSO会造成mcKLH不可逆变性。
3. 立即将半抗原溶液全部加入到200 μL SMCC-mcKLH溶液中，混匀得到半抗原-mcKLH混合液，室温避光孵育2 h。
注意：反应进行期间，可提前进行步骤4的操作，完成脱盐柱的平衡。
4. 脱盐柱预平衡
通过脱盐纯化去除EDTA和叠氮化钠，这些物质不应注射到实验动物体内。脱盐无法将未偶联的载体蛋白与偶联蛋白分离开；但由于本方案中使用了大大过量的半抗原，因此不太可能存在大量未偶联的载体蛋白。
4.1 将一个空的离心柱放入一个 15 mL 收集管中。
4.2 通过反复倒置试剂瓶重悬纯化树脂填料。然后取3.0 mL悬液加入柱中，让树脂沉降。让柱缓冲液依靠重力从柱中排出。初始时，可能需要施加一些压力使最初的几滴缓冲液流出。以1000 × g离心柱子2分钟，弃去储存缓冲液，将柱子放回同一个收集管中。
注意：纯化树脂以20%乙醇的悬液形式提供，树脂与乙醇的体积比为3:1(v/v)。
4.3 向脱盐柱树脂顶部加入2 mL PBS，1000×g离心2分钟，弃去流出液。
注意：若偶联物短期1周内使用：可使用PBS完成脱盐；如需冻存，必须使用试剂盒配套的纯化缓冲液，可避免冻融过程蛋白失活析出
4.4 重复步骤4.3两次，第三次洗涤时加入PBS，直到进入下一步骤时再进行离心。
注意：使用定角转子时，在柱子背对转子中心的一侧做标记。在后续所有离心步骤中，将柱子放入离心机时，标记面应背对转子中心。
4.5 第三次洗涤离心后，脱盐柱中应无溶液残留，如有残留，可短暂离心直至溶液完全排出；
5. 偶联物脱盐纯化
5.1将准备好的脱盐柱放入新的15 mL离心管中，并将步骤3中的全部样品加入脱盐柱中。
注意：若反应出现沉淀，离心收集上清单独纯化，沉淀留存；纯化完成后将沉淀与纯化液合并使用。
5.2 脱盐柱1000 × g离心2分钟，收集管中的即为纯化偶联物。
6. 保存
6.1 纯化后可直接用于动物免疫；若存放超过数日，无菌过滤后置于无菌容器，4℃短期保存或分装-20℃冻存。
Introduction
mcKLH is a high-quality form of KLH that is harvested from limpets grown in mariculture. It exhibits immunogenicity comparable to KLH, yet provides enhanced stability and efficiency as a carrier protein for generating anti-hapten antibodies. Several antigen molecules can be conjugated to each mcKLH molecule to increase their immunogenicity and likelihood of eliciting immunized animals to produce high-titer antisera to the epitopes of interest. Meanwhile, KLH has a high molecular mass (0.5 to 13 million daltons; aggregates of 350 and 390 kDa subunits) and elicits a stronger immune response than BSA or OVA. Consequently, mcKLH is a popular carrier protein for conjugation to haptens and other weak antigens to make them more immunogenic for antibody production.
Maleimide Activated mcKLH Conjugation Kit uses a simple and quick process for mcKLH conjugation of haptens. The carrier proteins are activated to present an available maleimide group that reacts with sulfhydryl-containing haptens. The kit provides SMCC activated mcKLH, all the reagents, purification resin and empty spin columns, as well as a detailed step-by-step protocol. This kit is available in two sizes, supporting either 1 or 5 independent conjugation reactions.
| M1509078 | 组分 | 物理外观 | 1 reaction | 5 reactions | 储存温度 | 每次反应用量 |
| M1509078A | SMCC Activated mcKLH | 冻干粉 | 2 mg | 5×2mg | 2-8℃，避光，禁止冷冻 | 2mg SMCC-mcKLH可用于偶联2mg的半抗原 |
| M1509078B | 偶联缓冲液 | 无色透明液体 | 6 mL | 30 mL | 2-8℃. | 请按说明配制 |
| M1509078C | 纯化缓冲液 | 无色透明液体 | 10 mL | 50 mL | 2-8℃. | 请按说明配制 |
| M1509078D | 纯化填料 | 白色微珠混悬液 | 3 mL | 15 mL | 2-8℃，禁止冷冻 | 每次反应需使用3mL |
| M1509078E | 离心柱管 | 透明管体 | 1 EA | 5 EA | 2-8℃. | 每次反应需使用1个 |
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ26F0939012 |
分析证书 | M1509078 |
| ZJ26F0939011 |
分析证书 | M1509078 |
危险品化学品经营许可证（带存储）