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UltraBio™ 哺乳动物活性蛋白抽提试剂
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为什么选择此级别
BioReagent,哺乳动物样品抽提用 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
2-8°C储存。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
阿拉丁生产的 UltraBio™哺乳动物活性蛋白抽提试剂 (UltraBio™ Mammalian Active Protein Extraction Reagent) 是一种用于快速、高质量、高产量、高活性提取哺乳动物细胞或组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的活性蛋白抽提试剂。本产品是一种含有特定的经过精心筛选以确保蛋白抽提效果良好的比较温和的非变性去垢剂(detergent)的缓冲液(pH7.6)，既确保了蛋白能被高效抽提，抽提效果强，又能确保提取获得的蛋白样品中蛋白或酶的活性能被很好地保留，便于进行后续的蛋白活性分析检测。由于本产品能确保提取的蛋白样品的活性，所含的去垢剂比较温和，虽然对于膜蛋白也有很好的抽提效果，但对于一些难溶性蛋白的抽提效率相对较低。如果希望获得比较高的难溶性蛋白的得率，建议使用含有强去垢剂的适当抽提试剂。对于使用本产品抽提获得的蛋白溶液，如果希望去除其中的去垢剂，可以通过透析或超滤方法去除。本产品能够快速、温和、有效地抽提哺乳动物细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。例如，免疫印迹(Western blot)、免疫沉淀(Immunoprecipitation)、免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)和 ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)等常规生化分析，luciferase、β-gal、alkaline phosphatase、chloramphenicol acetyltransferase (CAT)等报告基因(Report gene)酶活性检测，PKA、PKC和酪氨酸激酶(tyrosine kinase)等蛋白激酶活力的检测，以及带有 HA、Flag、Myc、V5、His 和 GST 等标签蛋白的分离纯化等方面的用途。
产品应用：
本产品能够快速、温和、有效地抽提哺乳动物细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。
产品优势：
本产品能够快速、高质量、高产量、高活性提取哺乳动物细胞或组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的活性蛋白抽提试剂。
使用说明：
1.溶液的准备。
取适量的 UltraBio™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，根据具体实验目的加入适量的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物 (P752091)，也可以根据实验目的选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂混合物 (P775091)。放置于冰浴备用。如有必要，可以考虑选购重组全能核酸酶 (O775185)，并添加到本产品中使最终浓度为 50U/ml 以降低抽提产物的粘稠度。
2.贴壁细胞的蛋白抽提。
a.洗涤细胞(可选做)：吸除细胞培养液，加入适量 PBS，轻轻摇动，吸除 PBS。注意：可根据具体情况，选择洗涤与否。如果培养液和培养液中添加的药物不会影响后续的实验，可以不进行细胞洗涤。如果影响比较大，就需要再重复洗涤一次。
b.裂解细胞：吸净细胞培养液或洗涤液，加入适量的 UltraBio™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，冰上孵育 2-10min，具体用量参照表 1。加入抽提试剂后会发现，细胞接触抽提试剂后会立即发生裂解。根据不同的细胞类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育 2-20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让细胞充分裂解。对于常规的检测，抽提试剂加入后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间，可能会增加 10-50%不等的蛋白得率，不同的细胞会有所不同。
表一: 不同规格的细胞培养器皿中哺乳动物活性蛋白抽提试剂的用量表。
| Multiple Well Plates or Dishes | Growth area (cm²) | Volume of Extraction Reagent (μl) |
| 10-cm dish | 55 | 500-1000 |
| 6-cm dish | 21 | 200-400 |
| 6-well plate | 9.5 | 100-200 |
| 12-well plate | 3.8 | 50-100 |
| 24-well plate | 1.9 | 25-50 |
| 48-well plate | 0.95 | 12.5-25 |
| 96-well plate | 0.32 | 5-10 |
c.用移液器将细胞抽提产物吹打悬起并转移到离心管中，14,000g 4℃离心 5-10min。
d.将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
3.悬浮细胞的蛋白抽提。
a.收集细胞：将细胞 2500g 4℃或室温离心 10min，弃上清。
b.洗涤细胞(可选做)：用 PBS 洗涤细胞，2500g 4℃或室温离心 10min，弃上清。
c.裂解细胞：弹击离心管底，使细胞沉淀适当分散开。参考表 1，加入适量冰浴预冷的UltraBio™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，适当混匀并冰上孵育 2-10min，以裂解所有的细胞。加入抽提试剂后会发现，细胞接触抽提试剂后就会立即发生裂解。根据不同的细胞类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育 2-20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让细胞充分裂解。对于常规的检测，裂解液加入后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间，可能会增加 10-50%不等的蛋白得率，不同的细胞会有所不同。
d.14,000g 4℃离心 5-10min。
e.将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
4.组织的蛋白抽提。
a.组织的处理：把组织剪切成细小的碎片，或液氮冷冻后研磨成粉末。
b.匀浆和抽提：按照每 20mg 组织加入 200-400μl 抽提试剂的比例加入 UltraBio™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，用玻璃匀浆器匀浆，研磨，直至充分裂解。
c.冰上孵育 2-10min。根据不同的组织类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育 2-20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让组织充分裂解。对于常规的检测，匀浆后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。
d.14,000g 4℃离心 5-10min。
e.将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
常见问题：
1.抽提蛋白产量低。
a.细胞或组织裂解不充分。延长冰上孵育时间或在孵育期间适当摇动，或适当增加蛋白抽提试剂的使用量。
b.蛋白发生降解。加入蛋白酶抑制剂可抑制蛋白降解。
c.组织匀浆不太充分。适当延长匀浆或研磨时间。
d.蛋白溶液的粘稠度太高。一方面可以考虑加大抽提试剂的用量，另一方面可以考虑添加全能核酸酶等以降低粘稠度。
2.外源表达蛋白量偏少或检测不到。
a.外源蛋白表达量低。考虑优化细胞质粒转染或病毒感染的操作流程。
b.质粒或病毒有误。考虑设置适当的阳性对照，并对质粒或病毒包装质粒进行测序和核对，并对表达效果进行测试和验证。
注意事项：
1.抽提蛋白样品的所有步骤都宜在冰上或 4℃进行，以保证蛋白的活性。
2.可以根据需要在抽提试剂中添加适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物 (P752091)，也可以根据实验目的选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂混合物 (P775091)。
3.可以考虑选购重组全能核酸酶 (O775185)，并添加到本产品中以降低抽提产物的粘稠度。
4.抽提 His 标签重组蛋白如果后续用于镍柱等的纯化，通常应避免加入含 EDTA 的试剂。因为 EDTA 会破坏大多数的金属螯合纯化介质(例如 Ni-NTA 纯化介质).
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
规格
产品名称
UltraBio™ 哺乳动物活性蛋白抽提试剂
别名
哺乳动物活性蛋白抽提试剂
英文别名
Mammalian Active Protein Extraction Reagent
规格或纯度
BioReagent, 哺乳动物样品抽提用
分子类型
生物试剂/缓冲液
产品线
生物产品
储存与运输
物理形态
液体
储存条件
2-8°C储存
运输条件
低温运输
稳定性与储存
2-8℃储存（1年）；-20℃长期储存。
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ25F0725047 |
分析证书 | M751612 |
溶液计算器
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