计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent,for DNA and RNA applications,分子生物学级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
室温。常规运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
细胞核是一个功能单位,完整的保存了遗传物质,并指导RNA的合成。RNA是蛋白质及其他细胞组分合成所必须的。在大多数细胞类型中,由于核被膜与内质网的连续性以及细胞核表面与细胞骨架之间的连接等原因,细胞核是被固定于细胞中的。流式细胞术是一种快速、准确、高效的测定和分析细胞DNA含量的方法,近年来已广泛应用于植物研究中,如细胞周期分析、植物倍性鉴定、染色体分拣、细胞核DNA含量测定、生殖途径鉴定、DNA变异分析、遗传稳定性分析和体胚发生分析等。只通过物理方法即切碎叶片往往不能获取大量完整的细胞核,还需要加入一些特定成分的缓冲液,使植物细胞破损,分散细胞器,进而解离出细胞核,为后续的核DNA提取和DNA含量分析做准备。流式细胞术测定的生物细胞必须处于单细胞悬液状态,制备优质的细胞核悬液的关键在于选择合适的细胞核分离缓冲液。不同植物的组织结构和化学成分存在较大差异,使用细胞核分离缓冲液的效果不同,而且目前没有一种普遍适用的细胞核分离缓冲液,因此需要尝试不同的缓冲液,甚至改进其成分,以获得最佳的细胞核分离效果。
细胞核分离缓冲液(Nuclear Separation Buffer,NSB)又称细胞核隔离缓冲液(Nuclear Isolation Buffer, NIB),也称解离缓冲液(Dissociation Buffer),可以将细胞核跟细胞膜、内质网、细胞骨架等胞内成分分离开来。目前常用的解离液有Galbraith、Tris-MgCl2、HEPES、WPB、LB01、mGb、Marie、GPB、OTTO和Marie等,各种解离液成分和浓度各不相同,不同的植物样品需要选择相适应的解离液,OTTO解离液(I和Ⅱ)主要由柠檬酸、吐温、磷酸氢二钠等组成。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
OTTO I解离液和OTTO II解离液的主要区别在于成分、适用样本和实验效果。OTTO I解离液成分较为温和,适合细胞结构简单的样本,细胞核完整性较好,但回收率可能较低;OTTO II解离液成分稍强,更适合细胞结构复杂或富含多糖、多酚的样本,细胞核回收率较高,但需严格控制实验条件以避免细胞核破碎。实验者应根据样本类型和实验需求选择合适的解离液。
操作步骤(仅供参考):
细胞核微量提取方法:
1、取新鲜的植物样品0.1~0.5g,用蒸馏水冲洗,滤纸吸干水分,用锋利的刀片切碎,置于匀浆器中,加入2ml解离液,匀浆1~2min。
2、用2层无菌平纹纱布过滤匀浆物,再用2ml解离液冲洗匀浆器和纱布,合并滤液。
3、室温下70r/min 离心5min,转移上清液至新离心管中,700r/min 离心15min,去除上清液,保留下层细胞核沉淀。
4、核沉淀可重新悬浮于HEPES缓冲液中,-70℃保存,用于核裂解、核DNA提取和纯化等下游实验。
注意事项:
1、样品量过少或者匀浆不充分可能会导致获得的细胞核很少,影响下游实验。
2、解离液选择不合适、样品保存不当、样品反复冻融、提取过程过分剧烈都可能导致提取的DNA断裂或降解。
3、试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:12个月有效。室温保存。
通过匹配包装上的批号来查找并下载产品的 COA,每批产品都进行了严格的验证,您可放心使用!
| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | O1372516 |
我们的级别选择指南涵盖了目录中所有的变体的纯度、稳定剂状态和应用适用性。
查看 BioReagent 级别指南 → 查看 Suitable for molecular biology 级别指南 → 查看 for DNA and RNA applications 级别指南 →