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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
pCMV-HA-p53是阿拉丁自行研发生产的在哺乳动物细胞中表达HA标签的人源p53(1-393aa)融合蛋白的质粒,可以方便使用抗HA标签的抗体来识别p53蛋白的表达,或进行免疫共沉淀(Co-IP)分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌,而在转染哺乳动物细胞后,可使用G418 筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。G418和新霉素效果一致,但G418的细胞毒性更低。p53中文名为细胞肿瘤抗原p53 (Cellular tumor antigen p53),是调控细胞周期的重要转录因子,主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等,野生型的p53是一个重要的抑癌基因,在抑制癌症发生过程中扮演重要的角色,因此被称为“基因组的守护者”。p53全长393氨基酸,理论分子量为43.7kDa,1979年因其在SDS-PAGE凝胶电泳中展示的分子量约为53kDa而得名p53,这种分子量的差异源自于p53存在大量的脯氨酸残基,减缓了其在SDS-PAGE凝胶电泳中的迁移速度1-2]。pCMV-HA-p53质粒的主要信息如下:pCMV-HA-p53质粒(6630bp)的图谱如下:pCMV-HA-p53质粒的详细图谱见说明书:https://www.aladdin-e.com/Manual/D3033 pCMV-HA-p53.pdf。pCMV-HA-p53中没有的酶切位点包括:pCMV-HA-p53中的单酶切位点包括:pCMV-HA-p53质粒中推荐使用的测序引物序列如下:T7-F primer (863-882): 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' SP6-R primer (2181-2200): 5'-ATTTAGGTGACACTATAGAA-3'pCMV-HA-p53的全序列信息:D3033 pCMV-HA-p53-全序列.txt。在HEK293T细胞(人胚肾细胞)中共转pCMV-HA-p53和pCMV-3X Flag-LTA,经免疫共沉淀(Co-IP)实验验证,p53和LTA两种蛋白可以相互作用,具体参考Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对。
注意事项:
本质粒未经阿拉丁书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。本质粒仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。 2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.25µg/µl,共400µl。可以直接用于转染细胞。 参考文献: 1.Levine AJ. Cell. 1997. 88(3):323-331. 2.Vogelstein B, Lane D, Levine AJ. Nature. 2000. 408(6810):307-310.