计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent,无菌 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
利用绵羊细胞与相应抗体(溶血素)结合成的复合物,可激活血清中的补体,导致红细胞溶解,当红细胞和溶血素量一定时,在规定反应的时间内,溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近 50%溶血( CH50)时,二者之间近似直线关系,故以 50%溶血作为最敏感的判断终点。以引起 50%溶血所需的最小补体量为一个 CH50U,可计算出待测血清中总的补体溶血活性,以CH50U/ml 表示。本实验主要反映补体经典活化途径的溶血功能,其结果与补体 C1~C9 各组成分的量及活性均有关。
试剂及配制
1、缓冲生理盐水:
(1) 贮存液:
Na2HPO4.12H2O2.85g KH2PO4 0.27g NaCl 17.00g
蒸馏水定容至 100mL,4℃保存备用。
(2)应用液:5mL贮存液加 95ml 蒸馏水,再加 10%硫酸镁 0.1mL,当日配制,12小时内使用。
2、2%绵羊红细胞:无菌采取绵羊血液,于等量 Alsever 液中可保存 3 周。用前以缓冲液洗 3次,并配成 2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。
3、溶血素:将绵羊红细胞溶血素(效价 1:4000),用应用液做 1:200 倍稀释(即 1mL溶血素加 199ml 应用液)。
4、待测血清:新鲜血液室温放置 30min,再 4℃放置 60min,使血块收缩, 4℃离心( 3000r/min)10min,取上清,-20℃保存。
操作步骤
试管法(改良 Mayer 法)
1、致敏羊红细胞: 2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素(1:2000),混匀,置 37℃水浴 30min。
2、稀释血清:待测血清 0.2mL,加应用液 3.8ml,稀释度为 1:20。
3、配制溶血标准管:全溶血管:2%绵羊红细胞 2mL加 8mL蒸馏水,混匀。50%溶血管:取全溶血管液 2mL加缓冲液 2mL。
4、按表所示,依次加各成分于试管中,混匀,置 37℃水浴 30min, 第 10 管为非溶血对照:
补体 CH50 测定试管法
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5、结果测定:取出试管,2000r/min 离心 10min,对照管应不溶血。肉眼比色,选与 50%溶血标准管相近二管,再用分光光度计测(波长 542nm、 0.5cm 比色杯) OD 值,确定与标准管最接近者为终点管,然后按下公式计算 CH50 值:
血清补体 CH50(U/ml)=(1/血清用量)×稀释度。
如第 5 管为终点管,测待测血清中CH50为66.7U/mL。血清补体 CH50 正常值为50-100U/mL。