本公司生产的 RNA/DNA/蛋白抽提试剂盒也称 RNA/DNA/蛋白共抽提试剂盒(RNA/DNA/Protein Co-isolation Kit)或 RNA/DNA/蛋白共提取试剂盒(RNA/DNA/Protein Co-extraction Kit)，是一种简单、方便、快速地从培养的动物细胞或组织、植物、酵母、细菌或病毒等单个样品中分步分别提取 RNA、基因组 DNA 和蛋白质的试剂盒。本试剂盒特别适合用于比较珍贵的样品，可以实现一个样品同时用于 RNA、DNA 和蛋白的抽提。本试剂盒不仅适用于少量样品的提取，还可用于大量不同样品的同时处理，特别适合同一个样品中 RNA、DNA 和蛋白质后续的同步检测。本试剂盒操作简单，使用便捷。本试剂盒操作简单快速，仅需约 1 小时即可完成 RNA、DNA 和蛋白质的提取。本试剂盒基于特殊裂解液多组分分离的原理，分步提取同一个样品的 RNA、DNA 和蛋白质。在样品中加入裂解液后进行裂解或匀浆，使细胞或组织充分裂解，加入氯仿混匀并离心后分为三层，包括上层无色水相(含 RNA)，中间相(含 DNA 和蛋白质)和下层红色有机相(含 DNA 和蛋白质)。RNA 溶于水相中，取出水相后用异丙醇沉淀即可获得纯化的 RNA；用无水乙醇沉淀中间相和下层红色有机相的可溶物，可获得纯化的 DNA；进一步用异丙醇沉淀有机相，可获得纯化的蛋白质。这些沉淀通过洗涤去除其它杂质成分后可用于后续的实验。本试剂盒采用高品质抽提试剂。本试剂盒提供的特殊裂解液可以有效抑制 RNA 的降解，保持样品中 RNA 的完整性；既可用于小量样品(例如 5-100mg 组织或 20-500 万个细胞)，也适用于大量样品(例如大于 1g 的组织或超过一千万的细胞)。通常，每一百万细胞可抽提得到 5-15μg RNA，每毫克组织可抽提得到 1-10μg RNA。本试剂盒抽提所得的 RNA、DNA 和蛋白质纯度高，用途广泛。抽提所得的总 RNA无蛋白、DNA 污染，溶于 DEPC 水或不含 RNase 的超纯水后的 A260/280 值为 1.8-2.0，可直接用于 RT-PCR、cDNA 克隆、纯化 mRNA、Northern blot、Dot blot、体外翻译、以及 RNase protection assay 等实验，也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序(High-throughput sequencing)等对 RNA质量要求较高的实验；抽提所得的 DNA 适用于 Southern 杂交、基因组 DNA 的 PCR 扩增、基因组 DNA 的甲基化等修饰分析及基因组 DNA 文库的构建等实验；提取的蛋白可用于 SDS-PAGE、Western blot、免疫沉淀等分析。
组分和说明
| R1373126-CG25T | Component | 25T | 4×25T | Storage | | R1373126A | 裂解液 | 25ml | 4×25ml | 2-8℃ | | R1373126B | 洗涤液 I | 22ml (第一次使用前需加入44ml无水乙醇) | 4×22ml (第一次使用前需加入44ml无水乙醇) | 2-8℃ | | R1373126C | 洗涤液 II | 66ml | 4×66ml | 2-8℃ | | R1373126D | 洗涤液 III | 7.5ml(第一次使用前需加入112.5ml无水乙醇) | 4×7.5ml (第一次使用前需加入112.5ml无水乙醇) | 2-8℃ | | R1373126E | DNA 溶解液 | 15ml | 4×15ml | 2-8℃ | | R1373126F | 蛋白溶解液 | 5ml | 4×5ml | 2-8℃ |
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产品应用
抽提所得的总 RNA 无蛋白、DNA 污染，溶于 DEPC 水或不含 RNase 的超纯水后的 A260/280 值为 1.8-2.0，可直接用于 RT-PCR、cDNA 克隆、纯化 mRNA、Northern blot、Dot blot、体外翻译、以及 RNase protection assay 等实验。
产品优势
本试剂盒操作简单，使用便捷。本试剂盒抽提所得的 RNA、DNA 和蛋白质纯度高，用途广泛。
使用说明
1. 准备工作：洗涤液 I、洗涤液 III 第一次使用前需分别加入相应的无水乙醇。
2.样品的裂解：
a.细胞裂解或组织匀浆。
(a)贴壁细胞。
吸尽培养液，每 10cm2 细胞加入 1ml 裂解液。一般 6 孔板每孔加 1ml 裂解液，12 孔板每孔加 0.5ml 裂解液。晃动 3-5 下，再用枪吹打 2-3下，确保全部裂解，然后吸至离心管中。
(b)悬浮细胞。
离心收集细胞，吸尽液体，每 500-1000 万动植物或酵母细胞，或 1000 万细菌，加入 1ml 裂解液。用枪吹打或适当 Vortex，确保全部裂解。
注：某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，以确保全部裂解。
(c)组织。
先将组织剪切成小块，放入普通玻璃匀浆器内。每 50-80mg 组织加入 1ml 裂解液，匀浆。对于 RNA 完整性要求比较高的情况，推荐先液氮冷冻组织块，然后在低温下用研钵研碎组织，随后再加入裂解液进行总 RNA 抽提。
b.对于某些蛋白，多糖或脂含量很高的细胞或组织，裂解液裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需 12,000×g 在 4℃ 离心 10 分钟，然后吸取澄清的裂解液裂解产物至一新的离心管中。
c.室温孵育 5 分钟，使样品充分裂解。
d.按每毫升裂解液加入 0.2ml 氯仿，Vortex 混匀或猛烈晃动 15 秒，室温孵育 2-3 分钟。
e.12,000×g 在 4℃ 离心 15 分钟。此时可见分层，分别为无色水相(上层)，中间层和红色有机相(下层)。其中上层无色水相用于 RNA 的提取(步骤 3)，中间层和下层红色有机相分别用于 DNA 和蛋白质的提取(步骤 4、5)。
3.RNA 的提取：
a.吸取含总 RNA 的上层无色水相至一新的离心管中，每毫升最初的裂解液约可吸取 0.5-0.55ml。
注：不要吸到中间层和红色有机相(下层)。如果要分离 DNA 和蛋白质可保留这两部分，4℃ 可存放过夜。
b.按每毫升最初的裂解液加入 0.5ml 无水异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀 10 分钟。如果希望提取 microRNA 等小 RNA，推荐-80℃ 沉淀过夜。
c.12,000×g 在 4℃离心 10 分钟，在管底可见 RNA 沉淀，弃上清。
d.每毫升最初的裂解液加入 1ml 洗涤液 I，Vortex 或颠倒混匀。
e.7,500×g 在 4℃ 离心 5 分钟，弃上清。再用离心机瞬时离心(>5,000×g)，小心吸尽液体。
f.待 RNA 略干后，加入 20-50μl DEPC 水溶解，-80℃ 冻存。注：切勿让 RNA 过分干燥，否则将极难溶解，且测出的 A260/280 值会低于1.6。
4.DNA 的提取：
a.接 RNA 提取步骤 3a，尽可能去除上层的水相后，保留中间相和红色有机相(下层)。
b.按每毫升最初的裂解液加入 0.3ml 无水乙醇，颠倒数次混匀。室温孵育 2-3 分钟。
c.2,000×g 在 4℃ 离心 5 分钟以沉淀 DNA。如果需提取蛋白质，吸取上清至一新的离心管中，-80℃ 可存放 1-2 个月，操作步骤见步骤 5。
d.吸除上清后，用洗涤液 II 洗涤 DNA 沉淀，每毫升最初的裂解液加入 0.8ml 洗涤液 II。室温孵育 30 分钟，期间轻柔颠倒混匀 2-3 次。
注：DNA 在洗涤液 II 中 2 小时内稳定。
e.2,000×g 在 4℃ 离心 5 分钟，弃上清。
f.重复步骤 4d-e 步骤一次。注：对于>200μg 的 DNA，步骤 4d-e 须重复两次，即共计 3 次。
g.按每毫升最初的裂解液加入 1.5ml 洗涤液 I 洗涤 DNA 沉淀，室温孵育 10-20 分钟，期间轻柔颠倒混匀 2-3 次。注：加入洗涤液 I 的 DNA沉淀在 4℃可存放 1-2 个月。
h.2,000×g 在 4℃ 离心 5 分钟，弃上清。
i. 室温放置晾干 DNA 沉淀 5-15 分钟，无明显液体后，加入适量 DNA 溶解液溶解。可 60℃ 温浴或适当增加 DNA 溶解液的量以促进 DNA 溶解。
注 1：从 50-70mg 组织或者 107 个细胞中分离的 DNA 沉淀溶于 300-600μl DNA 溶解液，DNA 的浓度通常为 0.2-0.3μg/μl。
注 2：提取的 DNA 沉淀可能不易溶于水和中性 Tris 缓冲液中。
注 3：从某些样品(尤其是组织)中提取的 DNA 中可能包含一些胶状的不溶物，可 12,000×g 在 4℃ 离心 10 分钟去除。
5.蛋白的提取：
a.接 DNA 提取步骤 4c，取沉淀 DNA 后的上清。
b.每毫升最初的裂解液加入 1.5ml 无水异丙醇，室温孵育 10 分钟。
c.12,000×g 在 4℃ 离心 10 分钟，弃上清。
d.用洗涤液 III 洗涤蛋白质沉淀。每毫升最初的裂解液加入 1ml 洗涤液 III，室温孵育 20 分钟。蛋白质在洗涤液 III 中，4℃ 可保存一个月，-20℃ 可保存一年。
e.7500×g 在 4℃ 离心 5 分钟，弃上清。
f.重复步骤 5d-e 2-3 次。
g.按每毫升最初的裂解液加入 1.5-2ml 无水乙醇，Vortex 混匀。室温孵育 20 分钟。
h.7500×g 在 4℃ 离心 5 分钟，弃上清。
i. 室温放置晾干蛋白质沉淀 5-10 分钟，用 200μl 蛋白溶解液溶解蛋白质，反复吸打，可用 50℃ 温浴使其完全溶解。
j.10,000×g 在 4℃ 离心 10 分钟去除不溶物。
k.分离得到的蛋白质样品可用于下游实验或-20℃ 保存备用。
保存条件：
4℃ 保存，一年有效。
注意事项：
（1）用户需自备无水异丙醇、氯仿、无水乙醇、DEPC 水。
（2）所有离心管，枪头及相关溶液都必须无 RNA 酶污染。耐高温器物可 150℃烘烤 4 小时以去除 RNA 酶，其它器物去除 RNA 酶可考虑用 0.01%的 DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。
（3）使用冻存的细胞或组织抽提总 RNA 的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的 RNase 会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提 RNA，推荐先加入适量裂解液，并裂解样品后冻存。
（4）必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着 RNA 样品呼气或说话，以防 RNA 酶污染。建议戴一次性口罩操作。
（5）裂解液含有毒物质，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触裂解液，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请听取医生意见。
（6）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
（7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
危险品化学品经营许可证（带存储）