乳酸氧化酶(LOX)

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基本描述

产品名称 乳酸氧化酶(LOX)
别名 乳酸氧化酶
英文别名 Lactate oxidase | LOX
规格或纯度 EnzymoPure™, BioReagent, 适用于分子生物学, ≥90%(SDS-PAGE), ≥ 45 U/mg
产品介绍

用途
用于乳酸含量的检测。
酶学性质
来源: 微生物 
酶学委员会编号: EC 1.1.3.2
分子量: 42 kDa (SDS-PAGE) 
等电点: pH 4.6
Km值: 7.5 ×10 -4 M (L-Lactate)
抑制剂: Hg²⁺ , Pb²⁺  
最适pH: 6.0-7.0 图1
最适温度: 50℃ 图2
pH稳定性: 6.0-8.5 (25℃,16h) 图3
热稳定性: 50℃以下稳定(pH7.0,30min) 图4
稳定性: -25~-15℃静置保存12个月保持
90%以上活性 图5

活性测定方法
1、原理  

反应生成的醌亚胺(Quinoneimine dye)的 量可用分光光度计在 555 nm 检测。
2、酶活定义 
单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化生成 1 μmol H2O2 所需的酶量。
3、试剂准备
试剂 I:0.2 MpH 6.5 磷酸钾缓冲液。
试剂 II:1kU/mL 过氧化物酶(POD)溶液。
试剂 III:50 mM4-AA溶液。
试剂 IV:0.5 MDL-乳酸溶液,pH6.5。
试剂 V:50 mMTOOS 溶液。
酶稀释液:10 mMpH7.0 磷酸钾缓冲液含10 μM FAD。
样品:用酶稀释液将酶稀释至0.05-0.2U/mL。 
按如下配制反应混合物:
试剂 I 10 ml 
试剂 II 0.25 mL 
试剂 III 1.5 mL 
试剂 IV 5 mL 
试剂 V 1.5 mL 
双蒸水补充到 50 ml
4、操作步骤
4.1 向 1 mL 比色皿中加入反应1mL反应混合液。 
4.2 将反应混合物在37 °C预热5min。
4.3 加入 20 μL 待测酶液,混匀。
4.4 在 555 nm处测定37 °C反应,记录1min内的吸光度变化(∆As)。
*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(∆Ab)
      ∆A=∆As-∆Ab
5、 活力计算  


1.020:反应液总体积(mL);
0.020:酶液体积(mL);
1:光路长度 (cm); 
1/2:1 摩尔过氧化氢生成 1/2 摩尔醌亚胺染料; 
df:稀释倍数; 
C:酶浓度( mg/mL); 
39.2:标准反应条件下,生色基团在 555 nm 处毫摩尔吸光系数(cm2/μmol)。

Application
For the detection of lactic acid content.
Enzymatic properties
Source: Microorganism
Enzymology Committee Number: EC 1.1.3.2
Molecular weight: 42 kDa (SDS-PAGE)
Isoelectric point: pH 4.6
Km value: 7.5 × 10-4 M (L-Lactate)
Inhibitors:  Hg²⁺ , Pb²⁺ 
Optimum pH: 6.0-7.0                                                   Figure 1 
Optimum temperature: 50℃                                        Figure 2
pH stability: 6.0-8.5 (25℃,16h)                                    Figure 3 
Thermal stability: Stable below 50℃ (pH7.0, 30min)  Figure 4
Stability: -25 ~ -15℃ standing store for 12 months
More than 90% activity                                                Figure 5


Enzyme activity definition
Unit enzyme activity is defined as the amount of enzyme required to catalyze the production of 1μmol H2O2 per minute under the following conditions.
Assay method for activity
1. Principle

The amount of Quinoneimine dye produced by the reaction can be measured by spectrophotometer at 555 nm.
2. Definition of enzyme activity
Unit enzyme activity is defined as the amount of enzyme required to catalyze the production of 1 μmol H2O2 per minute under the following conditions.
3. Reagent preparation
Reagent I: 0.2 MpH 6.5 potassium phosphate buffer.
Reagent II: 1kU/mL peroxidase (POD) solution.
Reagent III: 50 mM4-AA solution.
Reagent IV: 0.5 MDL- lactic acid solution, pH6.5.
Reagent V: 50 mMTOOS solution.
Enzyme diluent: 10 mMpH7.0 potassium phosphate buffer containing 10 μM FAD.
Sample: Dilute the enzyme with enzyme diluent to 0.05-0.2U/mL.
Prepare the reaction mixture as follows:
Reagent I is 10 ml
Reagent II 0.25 mL
Reagent III 1.5 mL
Reagent IV is 5 mL
Reagent V 1.5 mL
Double steam water to 50 ml
4. Operation procedure
4.1 Add 1mL reaction mixture into 1mL colorimetric dish.
4.2 Preheat the reaction mixture at 37 °C for 5min.
4.3 Add 20μL of enzyme liquid to be measured and mix well.
4.4 The reaction is measured at 37 °C at 555 nm and the absorbance change (∆As) within 1min is recorded.
* Replace enzyme liquid with enzyme diluent, other steps are the same, the absorbance of the resulting solution is blank absorbance (∆Ab)
∆A=∆As-∆Ab
5. Vitality computing

1.020: total volume of reaction liquid (mL);
0.020: enzyme liquid volume (mL);
1: optical path length (cm);
1/2:1 mole of hydrogen peroxide to generate 1/2 mole of quinone imide dye;
df: dilution ratio;
C: Enzyme concentration (mg/mL);
39.2: Under standard reaction conditions, the millimolar absorption coefficient of the color group at 555 nm (cm2/μmol).

AI解读

产品规格参数

物理形态 冻干(Lyophilized)
浓度 ≥ 45 U/mg
储存温度 -20°C储存,避免反复冻融
运输条件 超低温冰袋运输
稳定性与储存 Store at -20℃ long term (12 months). Upon receipt, it is recommended to aliquot. Avoid freeze/thaw cycle.
CAS编号和信息 9028-72-2
分子类型

安全和危险性(GHS)

信号词 Danger
危险声明

H334: 吸入可能引起过敏或哮喘病症状或呼吸困难

预防措施声明

P261: 避免吸入灰尘/烟雾/气体/雾/蒸汽/喷雾

P342+P311: 如有呼吸系统病症:呼叫急救中心/医生。

质检证书(CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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