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超级感受态细菌制备试剂盒
有货
为什么选择此级别
BioReagent,无菌 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
-20°C储存。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
超级感受态细菌制备试剂盒是一种专门用于构建各类高转化效率大肠杆菌的试剂盒。本试剂盒可快速培养目标菌株，并通过理化方法诱导细菌成为高效感受态细菌。制备好的感受态细菌处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态，使细菌具有摄取外源DNA并使其基因型和表现型发生相应变化的能力，成为容易受质粒DNA转化的细菌。
本试剂盒可转化质粒及普通的连接产物，转化大质粒同样具有高效率。本试剂盒感受态效率可达10⁸-10⁹cfu/μg 质粒。本试剂盒同时提供了专门用于制备超级感受态的特殊细菌培养液，该培养基能够极大提高感受态菌的转化效率，在提高菌类培养速度的同时减少实验时间。本试剂盒使用操作简单，细菌培养好后仅需60分钟即可完成超级感受态细菌的制备。
本试剂盒适用于绝大部分常见的大肠杆菌，涵盖质粒保存菌株DH5α、Top10；蛋白表达菌株BL21(DE3)、Rosseta(DE3)、BL21 Condon Plus(DE3)、BL21(DE3)pLysS 和 BL21 Star(DE3)等，制备的菌株可广泛应用于分子克隆、基因工程、合成生物学等研究领域，帮助科研人员更高效地完成实验。
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使用说明：
一、平板活化菌株：
取出一支冻存菌株于超净台中，用无菌的接种环轻轻蘸取菌种后（此步也可用枪头蘸取），将目标菌种划线于LB平板上活化，37℃恒温培养12-18小时，得到活化平板（长出大小合适的单菌落即可）。
二、接种活化菌株：
在超净台中，用灼烧并冷却后的镊子夹取一个塑料枪头（或者灭过菌的牙签）。在超净台中挑取活化平板中的单克隆，然后把蘸有菌种的塑料枪头或牙签接种于3-5mL LB液体培养基中，37℃下220rpm振荡培养12-16h左右（不宜超过18h），得到过夜活化菌液。
三、菌液培养：
在超净台中，按照1:500的比例将过夜活化菌液接种于超级感受态细菌培养液中（例：0.1mL 过夜活化菌液接种于50mL超级感受态细菌培养液中），37℃ 220rpm振荡培养 2.5-3.5h。培养2.5h后测试OD600吸光光度值，直到OD₆₀₀在0.6-0.7之间（0.65 为宜）方可停止培养开始制备流程。
四、制备感受态细菌（所有环节均需在超净台及冰浴中进行）：
1、把培养的菌液置于冰上冰浴10min。同时将离心机预冷至4℃待用，超级感受态制备试剂A、超级感受态制备试剂B在冰上预冷备用。
2、将菌液转移至离心机上4000g离心5min，在超净台中将离心后的菌倒去上层的超级感受态细菌培养液（倒去培养基后可倒扣离心管充分沥干，沥干时间不要超过1min）。
3、以5：2的比例向菌液沉淀中加入预冷好的超级感受态制备试剂A（例：离心前50mL 菌液，则加入20mL超级感受态制备试剂A），轻柔重悬菌液沉淀（可将离心管平放于冰上，顺逆时针轻轻交替旋转离心管）。待沉淀完全重悬好后（无可见菌块），冰上预冷15min。
4、将菌液转移至离心机上4000g离心5min，在超净台中将离心后的菌倒去上层的超级感受态细菌培养液（倒去培养基后可倒扣离心管充分沥干，沥干时间不要超过1min）。
5、以10：1的比例向菌液沉淀中加入预冷好的超级感受态制备试剂B（例：离心前20mL 菌液，则加入2mL超级感受态制备试剂B），轻柔重悬菌液沉淀（可将离心管平放于冰上，抓住管口顺逆时针轻轻交替旋转）。待沉淀完全重悬好后（无可见菌块），冰上预冷15min。
6、在冰浴上进行分装，可以根据需要适当分装成50-200μL/管。（为保证感受态效率，分装EP管建议提前置于-80℃预冷）。
7、分装后立即使用液氮速冻，成品-80℃保存。-80℃保存的感受态细菌可保持六个月高转化效率。（分装时注意动作要快，且全程在冰上操作，感受态随时间的变化，其效率会在分装到最后略有下降）。
五、感受态转化：
1、从-80℃冰箱中取出一管感受态细菌放入提前准备好的冰盒中，冰上融化（对于新鲜制备的感受态可直接使用）。
2、在超净台中打开感受态细菌，向其中加入1-100ng质粒，使用移液枪轻轻混匀。如果检测感受态细菌的效率，加入10pg-1ng质粒，但质粒的体积不宜超过感受态细菌量的10%。如果转化连接产物，每50μL感受态细菌加入2-10μL连接产物。
3.、将感受态细菌-质粒混合物置于冰上30min，期间每隔10min轻弹几下EP管，使细菌和质粒充分混匀。
4、将感受态细菌-质粒混合物放入预热好的水浴锅中，42℃热激90s，再置于冰上5min。
5、向EP管中加入500μLLB培养基，使用移液枪轻轻吹打混匀，37℃，200rpm震荡培养1h。
6、若检测感受态细菌的转化效率，取100μL的细菌悬液涂布到含有相应抗生素的LB平板上进行鉴定。如果转化的产物为连接产物，则需要以2000-3000g的离心力离心1min或更长时间，以确保细菌充分沉淀，去除约400-450μL体积的LB培养液。使用剩余的LB 培养液（约50-100μL）重悬细菌沉淀，并将重悬后的细菌全部涂布到含有适当抗生素的LB 平板上。最后，将平板置于37℃培养过夜。
六、质粒快速转化法：
1、向50-100μL 融解的感受态细菌中加入1-100ng的质粒（质粒的体积不宜超过感受态细菌量的10%），并轻轻弹动离心管以混匀。
2、将混合液在冰浴或冰水中静置10min，以促进质粒的摄取。
3、将全部菌液涂布到含有适当抗生素的LB平板上，并在37℃下培养过夜。
产品优势：
1、高转化效率：经本试剂盒制备的感受态细菌，感受态效率可达108-109cfu/μg质粒。
2、操作简便：本试剂盒提供自配培养基，极大方便客户使用。菌液培养好后，仅需60分钟即可完成超级感受态细菌的制备。
3、菌种适配广：本试剂盒适用于绝大部分常见的大肠杆菌，涵盖质粒保存菌株DH5α、Top 10；蛋白表达菌株BL21(DE3)、Rosseta(DE3)、BL21 Condon Plus(DE3)、BL21(DE3)pLysS和BL21 Star(DE3)等诸多菌株。
4、兼容性高：本试剂盒适用于多种类型的DNA（质粒、PCR产物等）。同时对于大质粒（9kb以上）仍有高转化效率。
注意事项：
1、为保证感受态效率，感受态细菌制备过程中请勿使用抗生素。
2、为保证感受态制备效果，制备全程都要在无菌、低温条件下操作。制备操作尽量要快。
3、产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。产品应避免接触皮肤和眼睛，如不慎接触，应立即用大量清水冲洗。
规格
规格或纯度
BioReagent, 无菌
英文名称
Super Competent Cell Preparation Kit
储存与运输
储存条件
-20°C储存
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
Store at -20℃ long term (12 months).
组分与储存
| S1375495 | 组分 | 100T | 储存 |
| S1375495A | 超级感受态细菌培养液 | 125 mL | -20℃ |
| S1375495B | 超级感受态制备试剂A | 50 mL | -20℃ |
| S1375495C | 超级感受态制备试剂B | 5 mL | -20℃ |
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
输入批号以搜索分析图谱:
技术文档和文章
溶液计算器
常见问题
什么是「无菌」？
「无菌」表示该物料经过加工和检测，适用于特种工业加工。规格侧重于影响该应用性能的杂质——例如，电子应用的金属含量、电池应用的粒度、光学应用的折射率，或对水分敏感工艺的水分含量。
什么是「BioReagent」？
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存？
请于?20 °C条件下保存。需冷冻保存以维持规定的有效期。
本产品如何运输？
本产品采用保温箱配冰袋运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA？
每个订单都会随附分析证书（COA），您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA，请联系您的客户代表，或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。
产品仅提供给经过验证的企业、机构和合格的专业人员用于研发。不适用于人类、动物、诊断或治疗。
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