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Firefly&Renilla-Light 双萤光素酶报告基因检测试剂盒
有货
为什么选择此级别
BioReagent,用于化学发光 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
避光,-20°C储存。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
报告基因系统广泛应用于真核生物基因表达和细胞生理学研究，包括受体活性、转录因子、细胞信号转导、mRNA加工和蛋白质折叠等。“双报告基因”检测系统通常被用来提高实验精确度，即在一个系统中同时表达和测量两个独立的报告基因。一般来说，实验组报告基因与具体实验条件的影响是相关的，而共同转染的内对照组报告基因则是用来充当校正参数，作为内参提供反应基线。将实验组的结果与内对照组的结果进行约化处理，可降低由细胞存活率或转染效率的差异而导致的结果波动，同时还可消除仪器测定引起的实验误差。因此，双报告基因检测可以通过减少外部影响来获得更可靠的实验数据。
萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）以及海肾萤光素酶（Renilla luciferase）是最常用的“双报告基因”系统，两者均为单体蛋白，无需翻译后修饰，具有检测反应迅速、简便、灵敏的特点。 阿拉丁Firefly&Renilla-Light双萤光素酶报告基因检测试剂盒（Firefly&Renilla-Light Luciferase Reporter Gene Assay Kit）是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，符合高通量检测的需求。该检测试剂盒在同一个样品中先以一种新型萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase），后以腔肠素（Coelenterazine）为底物来检测海肾萤光素酶（Renilla luciferase），同时淬灭Firefly luciferase 的萤光信号，实现双萤光素酶报告基因检测。
相比于阿拉丁双萤光素酶报告基因检测试剂盒（货号D829607），本品具有以下优点：延长了发光信号的稳定性，近乎2小时的信号半衰期为实验设计提供了更大的灵活性；更符合高通量检测，无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，简化了实验流程；本试剂盒组分做了大量优化，与传统闪光型产品相比，无明显刺激性气味。Firefly&Renilla-Light双萤光素酶报告基因检测试剂盒可用于多种常用细胞培养液：RPMI1640、DMEM、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均为2小时左右（22℃），满足绝大多数高通量实验需求。
反应原理如下：
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使用说明：
一、自备材料
PBS；多道排枪；白色不透光细胞培养板；化学发光仪或酶标仪。
二、检测前准备
1、首次使用时将 Dual-FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer 一次性全部倒入Dual FIREFLYGLO Luciferase Substrate瓶中，充分混匀直至所有底物溶解。按使用需求进行分装，建议-70℃长期保存或者短期存放于-20℃不超过一个月，并尽快使用。
2、Stop & RENILLALIGHT Substrate，每次开盖前需进行短暂低速离心。
3、根据实际使用量，以100:1的比例将适量的Stop& RENILLALIGHT Reaction Buffer与 Stop & RENILLALIGHT Substrate 混匀，室温避光备用。例如：如果需要100ml反应液，则需要加入1ml的检测底物。
注：建议现配现用，剩余的反应液当次实验结束后，直接舍弃，不要留存。
三、操作方法
1、从细胞培养箱中取出细胞培养板，放置5-15min，恢复至室温。
注：建议使用白色不透光的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
2、Firefly Luciferase 反应检测
① 使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的Dual-FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer，加样体积与细胞培养液体积相同并混匀。由于需要分别加入两种检测溶液，为防止孔板液体溢出，96孔板建议加入80μl培养液，相应加入80μl检测溶液。
② 室温下孵育5-10min。
注：孵育时间，可根据细胞量进行适当调整，确保细胞充分裂解，得到稳定的发光检测结果。
③ 孵育后于化学发光仪或酶标仪中检测Firefly Luciferase报告基因活性。
注：为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后2小时内完成检测。
3、Renilla Luciferase 反应检测
① 使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的Stop&RENILLALIGHT Reaction Buffer，加样体积与初始细胞培养液体积相同并充分混匀。例如，96孔板建议加入80μl培养液，相应加入80μl检测溶液。
② 孵育至少10min后于化学发光仪或酶标仪中检测Renilla Luciferase报告基因活性。
注：为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后2小时内完成检测。
注意事项：
1、检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色细胞培养板。
2、由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
3、酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
4、为取得最佳淬灭以及发光结果，加入Stop&RENILLALIGHT Reaction Buffer 后，需要孵育至少 10min 才可以检测Renilla Luciferase报告基因活性。
5、Stop & RENILLALIGHT Substrate (100×) 配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于包装规格的情况，此时用无水乙醇把体积补足至包装规格，并混匀后即可使用。
6、萤火虫萤光素酶催化的生物发光的最强波长为560nm，海肾萤光素酶催化的生物发光的最强波长为480nm。
物理外观：
S1375705A, S1375705C, S1375705D: Liquid
S1375705B: Solid
规格
别名
辉光型双萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 荧光素酶报告基因
英文别名
Firefly&Renilla Luciferase Assay Kit | Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit
规格或纯度
BioReagent, 用于化学发光
英文名称
Firefly&Renilla-Light Luciferase Reporter Gene Assay Kit
应用
报告基因检测, 生物发光
敏感性
Light sensitive
储存与运输
储存条件
避光,-20°C储存
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
-20℃储存（12个月），避光。溶解后的Dual-FIREFLYGLO Luciferase Substrate-70℃保存12个月，或-20℃保存不超过1个月，避光。
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ25F0927011 |
分析证书 | S1375705 |
技术文档和文章
溶液计算器
常见问题
什么是「用于化学发光」？
「用于化学发光」表示该化学品经过纯化和检测，专用于专项分析技术。关键规格通常包括：常用检测波长处的受控紫外吸收、低不挥发残渣、受控的水分含量以及经验证的批间一致性。「用于化学发光」用于此工作流程中的流动相、样品制备和分析标准品。
什么是「BioReagent」？
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存？
请于?20 °C、避光条件下保存。本品对光敏感，请保存在原始的避光或棕色容器中。
本产品如何运输？
本产品采用保温箱配冰袋运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA？
每个订单都会随附分析证书（COA），您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA，请联系您的客户代表，或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。
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