产品介绍
铁是人体必需的元素之一，对人体的新陈代谢和身体健康具有重要作用，血液中铁的含量不足，就会造成缺铁性贫血。铁存在于人体所有的细胞内，各组织、器官包括各内分泌腺都含有铁。肝脏、脾脏和肺组织内含量较为丰富。成人体内含铁3～5克，大部分都以蛋白质复合物形式存在，极少部分以离子的形态存在。本试剂盒可用于动植物组织、细胞和血清（浆）或其他液体中的总铁离子定量。在酸性条件下，铁从蛋白质复合物中解离出来，然后在还原剂的作用下三价的铁离子(Fe³⁺) 被还原为 Fe²⁺。Fe²⁺在酸性条件下与三吡啶基三嗪（TPTZ）形成蓝色配合物，在593nm处有吸收峰，通过测定该波长吸光度即可计算总铁离子的含量。
| T1526098 | 组分 | 物理外观 | 50T | 储存 | 单次测试使用量 | | T1526098A | 缓冲液 | 液体 | 45 mL | 2-8℃. 避光 | 按需 | | T1526098B | 显色液 | 液体 | 21 mL | 2-8℃. 避光 | 300 μL | | T1526098C | 铁标准品（40mM） | 液体 | 0.5 mL | 2-8℃. 避光 | 10 μL | | T1526098D | 提取液 | 液体 | 45 mL | 2-8℃. 避光 | 按需 |
|
使用方法
1. 样品处理
(1) 组织样本：按照每0.01 g组织加入0.1 mL提取液的比例，用匀浆器或研钵冰浴匀浆。12000× g，4℃离心 10 min，收集上清液，置冰上待测。
(2) 细胞样本：收集细胞到离心管内，用冷 PBS 清洗细胞，离心后弃上清。按照每100万细胞加入0.1 mL提取液的比例，置冰上裂解 15 min，每 3 min 上下颠倒混匀一次，裂解完成后，12000× g，4℃离心 10 min，置冰上待测。
(3) 血清（浆）等液体样本：取200 μL 样本，加入600 μL缓冲液混合均匀（即稀释 4 倍），置冰上待测。如果样本浑浊，5000× g，4℃离心 5 min，取上清液，置冰上待测。
注：本试剂盒提取液不能使用 BCA 蛋白定量，如需测定蛋白浓度，推荐使用阿拉丁即用型Bradford蛋白定量试剂盒 (去垢剂兼容型) （B1509656）。
2. 样品稀释
(1) 为确保样品数值在标准曲线范围内，建议进行预实验将样品设置多个稀释倍数，以确定样品中总铁离子的大致浓度，如果数值不在标准曲线范围内，请调整样品的稀释倍数。
(2) 血清（浆）等液体样本在样本处理过程中已稀释 4 倍，通常无需再进一步稀释。细胞样本的总铁离子含量较低，也不建议稀释样品。
(3) 样本如需要稀释，血清（浆）等液体样本的稀释建议使用缓冲液，而细胞和组织样品的稀释建议使用提取液。
3. 绘制标准曲线
将40 mmol/L（40000 μmol/L）铁标准品用缓冲液进行稀释得到100、50、25、12.5、6.25、3.125 μmol/L的标准品，现配现用。
标准品稀释可参考下表：
| 序号 | 稀释前浓度（μmol/L） | 标准品体积（μL） | 缓冲液体积（μL） | 稀释后浓度（μmol/L） | | 1 | 40000 | 10 | 990 | 400 | | 2 | 400 | 400 | 1200 | 100 | | 3 | 100 | 800 | 800 | 50 | | 4 | 50 | 800 | 800 | 25 | | 5 | 25 | 800 | 800 | 12.5 | | 6 | 12.5 | 800 | 800 | 6.25 | | 7 | 6.25 | 800 | 800 | 3.125 |
|
备注：下述实验中每个标准品管需600 μL标准品（注意不要在此步骤直接检测吸光度）。
4. 样品测定
(1) 可见光分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 593 nm。
(2) 按下表设置反应体系加样。设置不加样品的空白对照管。
| 试剂名称 | 空白对照管 | 标准品管 | 测定样品管 | | 样品（μL） | 0 | 0 | 600 | | 标准品（μL） | 0 | 600 | 0 | | 缓冲液（μL） | 600 | 0 | 0 | | 显色液（μL） | 300 | 300 | 300 |
|
(3) 混匀，37°C 孵育30 min，若浑浊则需12000× g，离心 10 min。取800 μL上清液至1mL玻璃比色皿（光径1cm）中。以空白管调零，于波长593nm处读取标准品管和测定样品管的吸光度A。标准品管吸光度记为A标准，测定样品管吸光度记为A测定。
注：本试剂盒建议使用1mL玻璃比色皿测量吸光度。若比色皿容量大于1mL，可将反应体系各组分加样量等比例放大以满足检测需求。
5. 总铁离子含量计算
5.1 标准曲线的绘制
以标准品浓度为x轴，A<sub>标准</sub> 为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将 A测定 带入方程得到样品浓度Cₛₐₘₚₗₑ (μmol/L)。
5.2 总铁离子浓度计算
5.2.1 血清（浆）等液体样本：总铁离子含量 (μmol/L) = Cₛₐₘₚₗₑ × 4* × f
5.2.2 组织样本：
(1) 以组织湿重进行计算： 总铁离子含量 (μmol/kg wet weight) = Cₛₐₘₚₗₑ × f ÷ (m/V)
(2) 按蛋白浓度计算：总铁离子含量 (nmol/mg 蛋白) = Cₛₐₘₚₗₑ × f ÷ Cₚᵣ
5.2.3 细胞样本：
(1) 以细胞数量进行计算： 总铁离子含量 (nmol/10⁶ cells ) = Cₛₐₘₚₗₑ × f ÷ (N/V)
(2) 按蛋白浓度计算：总铁离子含量 (nmol/mg 蛋白)= Cₛₐₘₚₗₑ × f ÷ Cₚᵣ
注：
f：样本加入检测体系前的稀释倍数；
4*：血清（浆）等液体样本与缓冲液混合后被稀释了四倍；
m：组织湿重质量（g）；
V：样本提取液加入量(mL)；
Cₚᵣ：样本蛋白质浓度，mg/mL；
N: 用于裂解的细胞样本数量/10⁶ 。
注意事项
1. 操作过程中，样品与试剂等避免与铁器接触，以防污染。
2. 建议使用新鲜样本。如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1 个月。
3. 所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
4. 正式检测前，建议选择 2-3 个预期差异较大的样本进行预实验。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
结果展示
典型标准曲线：
ZJ26F0939015
危险品化学品经营许可证（带存储）