计算溶液所需的质量、体积或浓度。
,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
避光,-20°C储存。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
储运条件
长期保存请于 -20℃避光保存,Mix 融解后可在 4℃避光条件下稳定存放 一个月,尽量避免反复冻融。
产品简介
Taq SYBR® Green qPCR Premix 是 SYBR® Green I 嵌合染料法专用 qPCR 试剂,为 2× 预混液,包含除引物和 DNA 样品以外的所有 qPCR 组分,可减少操作步骤,缩短加样时间,降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶,配合精心优化的 Buffer 体系以及 PCR 反应促进因子,使产品具有特异性强、扩增效率高等特点,有效抑制非特异性扩增,可对宽广浓度范围的模板进行准确定量,获得稳定可靠的 qPCR 结果。
使用方法
1. 适配机型
| 产品 | 适用机型 |
| T295435(None Rox) | Bio-Rad CFX 全系列; Roche LightCycler™ 系列; Eppendorf Mastercycler® ep realplex 系列; Qiagen/Corbett Rotor-Gene® 系列; Takara Thermal Cycler Dice; analytikjena qTOWER系列等 |
| T295519(Low Rox) | ABI 7500/7500 Fast,ABI ViiA 7™; ABI QuantStudio™ 系列; Stratagene Mx3000P® /3005P™/4000™ |
| T325569(High Rox) | ABI 7000/7300/7700/7900 HT/7900 HT Fast, StepOne™,StepOne Plus™ 等 |
| T326397(Universal) | 全机型通用 |
2. 使用注意
① 因 Mix 中预混有染料,其保存或反应体系配制过程应避免强光照射;
② 使用前上下颠倒轻轻混匀 Mix,请勿涡旋振荡混匀,避免产生过多气泡。
3. 建议的 qPCR 反应体系
a. 通常推荐的引物终浓度为 0.2 μM,反应效果不佳时可在 0.1~1 μM 范围内进行调整;
b. 推荐模板加样量为 1~2 μl,如模板类型为未稀释 cDNA 原液,模板添加量不应超过总反应体系的10%。不同种类 DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同, 必要时可进行梯度稀释,以确定最佳的DNA 模板添加量。
4. qPCR 反应程序(可根据机型适当调整)
两步法
三步法
a. 根据引物的 Tm 值进行退火 & 延伸(退火)温度的设定;若扩增片段在 200 bp 以内,退火 & 延伸(延伸)时间可以设置为 15 sec;此外,退火 & 延伸(延伸) 时间的设置还需根据您使用的 qPCR 仪所需要的最短数据采集时间自行调整;
b. 不同 qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别,一般可使用仪器默认的熔解曲线 采集程序。
5. 实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时,则需要进行反应条件的优化,可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行: ① 引物浓度调整当引物终浓度在 0.1~1.0 μM 范围之间变化时,引物浓度越低, 扩增特异性越高,但扩增效率会有所下降。 ② 扩增程序优化需提高扩增特异性,可使用两步法程序或提高退火温度;需提高 扩增效率,可使用三步法程序或延长延伸时间。
6. 引物设计原则
① 扩增产物长度建议控制在 80~200 bp;② 引物长度为 18~25 bp;③ 正向引物和反向引物的 Tm 值相差不超过 1℃为佳,Tm 值控制在 58~62℃为佳;④ 引物的 GC 含量控制在 40%~60% 之间;⑤ 引物 A、G、C、T 整体分布尽量要均匀,避开 T/C 或者 A/G 的连 续结构(特别是 3' 端);⑥ 引物 3' 端最后一个碱基最好为 G 或者 C;⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列;⑧ 使用 NCBI BLAST 功能检索确认引物的特异性。
常见问题