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全能细胞分离液
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为什么选择此级别
BioReagent,即用型,无菌 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
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质量文档
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文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
是否无菌：是
全能细胞分离液是经过充分验证的密度梯度离心介质，适用于细胞、病毒与亚细胞颗粒分离。本产品基于成熟的密度梯度离心技术，可在 1.0~1.3 g/mL 密度范围内温和、快速、高效分离多种细胞、病毒及亚细胞组分，适用于绝大多数沉降系数＞60S 的生物颗粒分离实验。
产品核心组分是聚乙烯吡咯烷酮（PVP）包覆改性硅胶颗粒，颗粒粒径 15~30 nm，游离 PVP 含量仅 1%~2%，配方稳定可靠。硅胶颗粒天然存在粒径差异，离心过程中可发生差异性沉降，自发形成连续等渗密度梯度。实验操作灵活简便：既可借助梯度混合仪或高速离心机制备密度梯度；也可将样品与介质预先混匀，依靠原位生成的梯度完成分离，梯度构建与样品分离一步实现，单次操作即可获得目标组分，有效简化实验步骤、提升实验效率。
产品用途
适用于血液、组织等生物样本处理，可高效完成细胞、细菌、病毒、细胞器及各类亚细胞组分的分离、纯化与富集，还可有效分离完整活细胞与受损细胞及细胞碎片。
产品特点
● 活性保护优异：低粘度，等渗时无毒，生物相容性高，不穿透生物膜，不粘附细胞，可稳定保留生物颗粒密度与样本活性。
● 使用便捷高效：离心可自发形成连续密度梯度，支持大体积样本处理，操作简单、耗时短。
● 适配范围广泛：兼容多种常规缓冲液与培养基，可灵活调配1.0~1.3 g/mL密度梯度。
● 性能稳定可靠：配方优化，质控严格，理化性质稳定，原液可反复高压灭菌，实验重复性佳。
物理性质及指标
● 外观：无色至淡黄色液体
● 密度：1.130±0.005 g/mL
● 渗透压：max. 25 mOsm/kg·H2O
● 电导率：max. 100 mS/m
● pH：9.0±0.5
● 粘度：max. 15 cP
使用方法（仅供参考）
1 制备密度梯度介质
本产品依托密度梯度离心原理开展样本分离，利用不同细胞及颗粒在差异化密度体系中沉降速率的差异实现组分分离，因此工作液密度精度是保障分离效果的核心关键。在精准把控溶液密度的前提下，还需维持适宜的渗透压，以此保护待分离样本的结构与活性。
全能细胞分离液在平衡盐溶液、生理盐水或0.25 M蔗糖溶液中可发挥最佳使用效果。其中，细胞样本可在平衡盐溶液、细胞培养液或NaCl溶液配制的梯度中分离；而亚细胞组分或病毒易在含盐环境中发生聚集，因此建议使用蔗糖溶液配制的梯度分离。
注：制备梯度时可直接按照步骤1.1计算出的体积值，取相应体积的各溶液直接混合为相应密度的分离液，然后按照步骤1.3制备梯度。也可以按照步骤1.2，预先配制好等渗溶液，再根据所需的密度对等渗溶液进行稀释，然后按照步骤1.3制备梯度。
1.1一步法稀释（直接配制目标工作液）：
（1）请根据目标分离组分选择目标工作液密度和体积，然后按照以下公式计算出配制目标工作液所需的全能细胞分离液、稀释液和蒸馏水体积。
V0=V×(ρ−0.1ρ10−0.9)/(ρ0−1)
V0= 未稀释全能细胞分离液的体积 (mL)；
V = 目标工作液总体积 (mL)；
ρ= 目标工作液密度 (g/mL)；
ρ0= 未稀释全能细胞分离液的密度 (1.130 g/mL)；
ρ10= 稀释液的密度 (1.5 M NaCl 溶液的密度约为1.316g/mL)。
（2）根据以上公式计算出 V0 后，量取 V/10 的稀释液（1.5M NaCl 溶液或 2.5M 蔗糖溶液），将全能细胞分离液和稀释液充分混匀，最后用蒸馏水补足至 V 即可。以配制 100mL、密度为 1.07g/mL 的目标工作液、稀释液为 1.5M NaCl 溶液为例：已知 ρ=1.07g/mL、ρ0=1.130g/mL、ρ10=1.058g/mL、V=100mL，代入公式可得：V0=100×(1.07-0.1×1.058-0.9)/(1.130-1)=49.4mL。即取 49.4mL 全能细胞分离液和 10mL 1.5M NaCl 溶液混合，加蒸馏水定容至 100mL，可得目标工作液。
1.2 两步法稀释（先配制等渗溶液，再稀释至目标工作液）：
（1）等渗溶液（SIM）的配制：对于细胞样品，将全能细胞分离液与1.5M NaCl溶液或10×PBS按照体积比9:1的比例进行混合配制。对于亚细胞颗粒或病毒样品，将全能细胞分离液与2.5M蔗糖溶液按照体积比9:1的比例进行混合配制。
（2）请根据目标分离组分选择目标工作液密度和体积，然后按照以下公式计算出配制目标工作液所需的等渗溶液和稀释液的体积。细胞样本选用0.15M NaCl溶液或1×PBS稀释等渗溶液至所需密度；亚细胞颗粒或病毒样本则选用0.25M蔗糖溶液稀释等渗溶液至所需密度。
ρSIM=(9×ρ0+1×ρ10)/10
VSIM=V×(ρ–ρ2)/(ρSIM–ρ2)
V2=V-VSIM
ρSIM= 等渗溶液密度 (g/mL)；
ρ0= 未稀释全能细胞分离液的密度 (1.130g/mL)；
ρ=目标工作液密度 (g/mL)；
ρ10=等渗溶液稀释液密度 (1.5M NaCl 溶液的密度约为 1.058g/mL；2.5M 蔗糖溶液的密度约为 1.316g/mL)；
ρ2=目标工作液稀释液密度 (0.15M NaCl 溶液和 0.25M 蔗糖溶液的密度约为 1.00g/mL)；
VSIM=等渗溶液体积 (mL)；
V =目标工作液体积 (mL)；
V2=目标工作液稀释液体积 (mL)。
根据以上公式计算出 VSIM和 V2后，量取等渗溶液和稀释液，混合后即为目标工作液。以配制 100mL、密度为 1.07g/mL 的目标工作液、稀释液为 1.5M NaCl 溶液为例：已知 ρ0=1.130g/mL、ρ10=1.058g/mL，代入公式可得：ρSIM=(9×1.130+1×1.058)/10=1.123g/mL；然后已知 V=100mL、ρ=1.07g/mL、ρ2=1.00g/mL、ρSIM=1.123g/mL，代入公式：VSIM=100×(1.07–1)/(1.123–1)=56.91mL；最后，已知 V=100mL、VSIM=56.91mL，代入公式：V2=100–56.91=43.09mL。因此，可取 56.91mL 等渗溶液和 43.09mL 0.15M NaCl 溶液混合，可得目标工作液。
1.3 预制密度梯度：
从下至上按照从高密度到低密度逐层放置的先后顺序，用吸头或注射器，紧贴管壁，使液体自然缓慢流下，确保上层溶液（低密度）不会溅入下层（高密度）或者混入分界处，形成梯度。
注：可先用FBS将管壁湿润，然后除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的分离液平稳沿管壁流下，使其形成满意的界面。
2 密度梯度离心
密度梯度离心可结合实验需求，选用对应的离心方式。
2.1 角转子高速离心（形成自发梯度）：
全能细胞分离液将在约10,000×g（0.15 M生理盐水配制）或25,000×g（0.25 M蔗糖溶液配制）离心15分钟后，自发形成从管底至管顶的连续密度梯度。在此方法中，样品可在离心前直接与全能细胞分离液均匀混合。离心过程中，样本颗粒将在自发形成的梯度中依据其密度大小进行分层，并最终在与其自身密度相等的位置富集，形成清晰的等密度区带。本方法适用于亚细胞颗粒或病毒样本的高效分离。
2.2 水平转子低速离心（依赖预制梯度）：
对于活细胞等对剪切力敏感的样本，推荐使用水平转子进行低速离心（如400×g）。该方法通常依赖于预先制备的连续或不连续密度梯度（步骤1.3）。样品可在离心前用吸头或注射器缓慢注入到分离液之上。离心时需设置较慢的升、降速程序（如设置为0档或1档，离心20-30分钟）。本方法能有效维持梯度结构的稳定性，并避免已分离的细胞区带因流体扰动而重新混合，从而确保细胞能够温和地迁移至其等密度位置，并获得更高的细胞活性和回收率。
3 获取目标组分
密度梯度离心后体系会形成一个连续密度梯度（约1.0-1.3g/mL），各类细胞或颗粒都会漂浮或沉降到其自身密度（即浮力密度，Buoyant density）相等的等密度区带。小心吸取目标分层区带，即可获得目标组分。不同细胞及亚细胞组分在全能细胞分离液中的典型密度与分布位置可参考下表，该数据仅作实验参考，不同物种样本存在一定差异。
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4 清洗
由于全能细胞分离液没有细胞毒性，且不会粘附在细胞膜上，通常不必去除，细胞可直接转移到培养体系中，病毒可直接进行感染，细胞器可直接用于功能性研究。如有必要，也可以按照以下方法来进行清洗以去除。
（1）细胞样品：用预冷、5倍体积的生理盐水或PBS轻柔洗涤，200-400×g 4℃离心2-10分钟，弃上清，如有必要可以再重复洗涤2-3次，收集细胞沉淀。
（2）亚细胞组分：用预冷、5倍体积的生理盐水或PBS轻柔洗涤后，10,000-20,000×g 4℃离心10-30分钟，小心弃上清，收集沉淀。
注：具体的离心力取决于目标亚细胞组分。
（3）对于病毒、外泌体或更小的颗粒：未稀释的样品，100,000×g 4℃离心120分钟（水平转子）或90分钟（角转子）以沉淀全能细胞分离液中的介质，收集上清。
（4）也可根据文献报道用凝胶过滤、离子交换色谱法、超滤管离心和透析等方法进行洗涤。
5 参考数据：全能细胞分离液梯度的密度测定
可以使用折射仪测量梯度分级后的全能细胞分离液溶液密度。折射率与全能细胞分离液溶液的密度呈线性相关，有关20℃下蔗糖和氯化钠溶液中全能细胞分离液稀释系列的密度和折射率信息，请参见下表。
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注意事项
1.本产品离心后易在离心管管壁、管底残留二氧化硅沉淀，干燥后难以清洗，实验结束后需立刻清洗耗材；优先选用聚碳酸酯（PC）材质离心管。
2.本产品在 pH 5.5–10.0 区间性能稳定；pH＜5.5、含有 Ca²⁺、Mg²⁺等二价阳离子，或是高温条件，都会引发胶体二氧化硅胶凝失稳，实验体系应避免低 pH、高盐及含二价离子环境。
3.硅胶胶体长期储存下发生聚集属于固有特性。部分批次产品可观察到聚集物，表现为容器底部轻微沉淀，或是密度 1.04–1.05 g/mL 的淡白色条带；该条带可在梯度制备离心或预成型梯度低速离心过程中形成。硅胶聚集物不会干扰生物颗粒分离，绝大多数细胞、细胞器在分离液中的浮力密度大于 1.05 g/mL。对于常规细胞、病毒、细胞器分离实验，梯度介质产生的二氧化硅聚集体影响可忽略不计。
4.本产品为无菌封装，操作时严格无菌操作，防止污染。如需重新灭菌，仅原液可进行 121℃、30 min 高压灭菌；预先混合含盐、蔗糖的工作液灭菌易引发胶凝或焦糖化反应，不可采用 0.22 μm 滤膜过滤除菌。灭菌过程尽量减少液体与空气接触，避免气液界面析出固体颗粒，推荐使用窄口容器；若产生颗粒，可通过 0.45 μm 过滤或 500×g 低速离心 5 min 去除。灭菌后若出现液体蒸发损耗，补充对应体积蒸馏水即可，不会改变液体密度。
5.操作时请穿戴实验服与一次性手套，做好安全防护。
6.本产品仅限科学研究使用。
规格
别名
广谱型细胞分离液 | 通用细胞分离液 | 通用型密度梯度细胞分离液
英文别名
General Cell Separation Medium
规格或纯度
BioReagent, 无菌, 即用型
稳定性与储存
Store at RT long term (60 months).
英文名称
Universal Cell Separation Medium
储存条件
室温
运输条件
常规运输
产品线
生物产品
名称和识别符
分子类型
生物试剂/缓冲液
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
输入批号以搜索分析图谱:
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