计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent,分子生物学级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
2-8°C储存,避光。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
Blue High Sensitivity 双链DNA定量试剂盒不同于常规的基于吸光度的测量,这款试剂盒可以区分dsDNA、ssDNA或RNA,有选择性地检测dsDNA(见图2)。与传统DNA定量方法相比,本产品具有检测范围广、高灵敏度、高特异性等优点。 Blue High Sensitivity 双链DNA定量试剂盒可以在200 μL体系内定量0.2-100 ng的dsDNA(见图3)。此外,本产品还可以将其他污染物的影响降低至最低,可以耐受常规污染物例如蛋白质,盐,有机溶剂和洗涤剂等(见表1),且 本产品不具有细胞膜通透性,没有细胞毒性和诱发突变性,对人体安全无害。
产品组分表:
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储存条件
4℃避光保存,有效期见外包装。
产品参数
Ex/Em:485/530 nm(结合 dsDNA)

图 1. 在 dsDNA 过饱和的条件下,Blue的激发与发射光谱图
使用方法
1. 为了得到最佳结果,请使用精确校准的移液器和去 RNA 酶的枪头、试管以及检测板。建议检测时每个 DNA 标样和未知样品都设定 3 个复孔。如果检测时不只一块 96 孔板,建议每块 96 孔板都设定一条标准曲线,尽量减少检测板之间的误差。
2. 使用前,将产品从储存条件下取出恢复至室温。如果 B 组分出现沉淀,可以 37℃水浴溶解。每个组分应充分震荡或涡旋混匀、离心,以免造成不必要的试剂的损耗。
3. 每个待测样品对应 200 µL 的 Blue 工作液。对于一个 96 孔板,吸取 200 µL B 组分,加入到 20 mL A 组分中,涡旋混匀,配制成 Blue 工作液,为得到最佳结果,工作液应在一小时内使用完毕。如果将工作液重新储存并在 24 h 内使用,结果的准确性会有轻微损失。储存过程中,增强液可能会出现沉淀现象,可以通过涡旋震荡使其重悬。
4. 对于每个样品,吸取 200 µL 的工作液至黑色的 96 孔板微孔中。为确保结果精确可靠,建议每个测试样品和 DNA 标样分别做平行 3 个复孔,此过程也可以使用有精确量程的多通道移液器进行。黑色的检测板可以减少各测试样品间的荧光干扰。
5. 在 96 孔板微孔中,每孔加入 10 µL 的 dsDNA 标样或 1-20 µL 未知样品,并用移液器轻轻混匀。
6. 将微孔板室温避光孵育 5-10 min,为得到最佳结果,孵育结束后,应立即读取检测板。也可以在 6 h 内读取数据,但结果的精确性会有轻微损失。
7. 使用激发波长和发射波长在 485 nm 和 530 nm 处的酶标仪测量荧光值。
8. 制作一条标准曲线,计算检测样品的 DNA 浓度(见图 2)。
注:图 3 标准曲线仅供参考,您可以根据实际测得的数据自制标准曲线,从而求算样品的浓度。
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图 2. 使用 Blue High Sensitivity 双链 DNA 定量试剂盒检测不同类型核酸得到的相对荧光强度。
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图 3. 使用 Blue High Sensitivity 双链 DNA 定量试剂盒制作的 calf thymus DNA 标准曲线(Ex/Em 485/530)。
实验参考因素
1. 对于要检测的植物或动物来源的DNA样本,小牛胸腺DNA(Calf thymus DNA )常常作为制作DNA标样的参照物。 因为Calf thymus DNA具有双链结构、高度聚合,碱基分配均匀(AT含量58%,GC含量42%)。如果检测样品的荧光值超过了标准曲线,那么需要将样品做进一步稀释处理。为了保持结果的一致性,务必使每孔上样量均等,且不含有其他高浓度的污染物。
2. Blue High Sensitivity 双链DNA定量试剂盒可以测量范围在0.2-100 ng的dsDNA。对于一些不需要线性检测的样品,试剂盒检测范围可以扩展至200 ng。如需检测更低含量的样品,您可以将DNA标样用1×TE缓冲液作进一步的稀释,浓度可以稀释到0.02 ng/μL,然后按照常规程序每孔10 μL上样。
3. 对于不同种类的检测仪器,您可以优化仪器设置,以获取最佳线性度。一些可能会影响最终线性度和相对荧光强度的因素有:(1)激发和发射波长与带宽;(2)截止型滤波器;(3)灵敏度设置;(4)移液的准确性;(5)微孔板制造商。
4. 表1详细列出了几种常见的DNA污染物,如盐、溶剂、洗涤剂和蛋白质等。
表 1. 常见的 DNA 污染物对 Blue High Sensitivity 双链 DNA 定量试剂盒的影响
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注:三份 dsDNA 平行样品的标准曲线,分别在上述含有指定浓度污染物的条件下(初始浓度进行检测,“Pass”指与没有污染物的体系相比较,实验结果变化范围<20%。所有样品用 Molecular Devices Gemini XS 酶标仪在 485 nm 处激发,在 530 nm 处测荧光强度。“ Pass *”指由此条件测得的标准曲线有少许变动。“dNTPs**”指 dATP, dCTP, dGTP, dTTP 的混合物。
注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | W1372296 |
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