基本描述

产品名称	WELQ Protease
别名	WELQ蛋白酶
规格或纯度	5U/μl
产品介绍	阿拉丁生产的WELQ Protease，也称WELQut Protease、WELQ蛋白酶或WELQut蛋白酶，是阿拉丁自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组蛋白酶。WELQ蛋白酶能特异性地识别四肽序列Trp-Glu-Leu-Gln (W-E-L-Q)，并对Gln (Q)之后的肽键进行酶切，常用于重组蛋白除去His或者其它融合标签，其最突出优势是酶切后不会在目的蛋白的N端留下任何额外的氨基酸残基。本WELQ蛋白酶反应条件比较宽泛。WELQ蛋白酶是一种源自金黄色葡萄球菌的丝氨酸蛋白酶类似蛋白(Serine protease-like proteins) 1,2]，该蛋白酶反应时不需要特殊的反应缓冲液，能在比较宽泛的温度区间(4-30℃)及pH区间(6.5-9.0)识别WELQ多肽序列，并在Gln (Q)之后进行蛋白或多肽的剪切。本WELQ蛋白酶能适用于His标签蛋白的柱上酶切。本WELQ蛋白酶带有His标签，特别适用于His标签蛋白的柱上酶切。在切割His标签蛋白的时候，切下的His标签和WELQ蛋白酶可结合于His纯化柱(His-tag Purification Resin)上，而目的蛋白在穿透液中，这样洗脱下来的蛋白中理论上就不会含有His标签和WELQ蛋白酶，极大地方便了目的蛋白的纯化。如果不进行柱上酶切，分别过镍柱和能除去目的蛋白融合标签的纯化柱也可以方便地去除WELQ蛋白酶和目的蛋白上切割下来的标签。阿拉丁的WELQ Protease活性鉴定结果可参考图1。,图1. 阿拉丁的WELQ Protease 与T公司同类产品(Competitor)切割GST标签融合蛋白(WELQ四氨基酸序列位于GST和10kD目的蛋白之间)的效果图。将含有WELQ Protease识别位点的36kD GST标签融合蛋白与WELQ Protease进行反应，底物的用量为50μg，酶的用量分别为1U和2U，在50mM Tris-HCl (pH8.0)的缓冲液中反应，设置4℃与25℃两种反应温度，在反应0、1、3、6小时以及过夜(Overnight, O/N) (超过16小时)后取样，进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约10kD的目的蛋白和约26kD的GST标签。如图所示，本产品与T公司(Competitor)的WELQ蛋白酶具有相当的活性。实际效果会因样品种类、检测条件等不同而存在差异，本图仅供参考。WELQ Protease分子量大小约22kDa，纯度≥95%。不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。酶活性单位定义： The amount of enzyme required to cleave ≥99% of 100µg of a control protein in 16h at 20℃.WELQ Protease储存液组成为：10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，140mM NaCl，2.7mM KCl，50% (v/v) Glycerol，pH7.3。WELQ Protease的酶切体系中可以兼容0.01-1% Triton X-100/Tween-80，5-50mM DTT，100mM NaCl，20-300mM Imidazole，100mM Tris-HCl (pH8.0)，100mM Na3PO4 (pH7.4)，20mM K3PO4 (pH7.4)。注意事项： 2M尿素、0.25M盐酸胍会抑制WELQ Protease的部分酶活性。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明： 1.WELQ Protease酶切条件优化。WELQ Protease识别位点的暴露程度、位点附近的氨基酸序列以及蛋白的聚集程度都会影响WELQ Protease的酶切效果。因而对不同的蛋白进行酶切时，建议通过预实验来优化酶切条件。建议从以下三个方面进行酶切条件的优化：反应温度(4-30℃)、反应时间(1-12h或过夜)、酶的用量(酶活性单位数量与目的蛋白微克数比例(U/μg)为1:5-1:100)。如下是一个简单的摸索酶用量、反应时间的实验方案。a.按照下表设置酶切反应体系： Component Amount Target Protein 50μg WELQ Protease (5U/μl)* 0.5/1/2/10U Reaction Buffer** To 50μl 设置酶与底物蛋白的比例分别为1:10、1:50、1:25、1:5(U/μg)。除1:5的比例外，建议将WELQ Protease稀释至0.5U/μl后使用。建议使用10-100mM Tris-HCl (pH8.0)作为Reaction Buffer。b.将反应混合物置于15-30℃反应。分别在反应1、3、6、12小时(或过夜)后，取出10μl酶切产物，用于后续的SDS-PAGE检测。当反应时长大于16小时时，建议酶切反应温度设置在20℃以下。c.将上一步骤的留取的蛋白样品进行SDS-PAGE电泳分析，选择比较理想的反应的条件。确定了优化后的反应条件后，后续可以等比例扩大反应体系，选择进行溶液体系中的酶切或柱上酶切。如果用于柱上酶切，可能后续还需要进一步的调整酶用量等的酶切条件优化。2.融合蛋白在溶液体系中的酶切和纯化。a.推荐使用10-100mM Tris-HCl (pH8.0)、10-100mM Na3PO4 (pH7.4)或10-20mM K3PO4 (pH7.4)作为Reaction Buffer进行酶切。注：如果酶切后的目的蛋白后续需要进行亲和层析，Reaction Buffer可以含有50mM NaCl以及5-20mM Imidazole。b.按照优化后的酶与目的蛋白的比例和酶切时间，加入WELQ Protease，在15-30℃中进行反应。注：如果蛋白不稳定或者酶切反应时长大于16小时，建议选用4-20℃进行反应。c.将酶切后的蛋白样品加入预先用Reaction Buffer平衡好的 His-tag Purification Resin 中，室温结合20-30分钟。d.500×g离心5分钟，收集上清，其中含有切除了标签的目的蛋白，WELQ Protease则结合在凝胶沉淀中。如果目的蛋白是His标签蛋白，那么残留的没有被酶切的His标签蛋白、WELQ Protease和酶切下来的His标签则结合在凝胶沉淀中，切除了标签的目的蛋白在溶液中。如果目的蛋白不是His标签融合蛋白，那么切除下来的带有WELQ的片段，还需要用适当的方法去除，例如如果是GST标签，那么可使用GST纯化柱去除GST标签。3.融合蛋白的柱上酶切和纯化。如果目的蛋白带有His标签并且His标签的羧基端(C端)同时带有WELQ序列，本WELQ Protease可以在镍柱亲和层析过程中进行融合蛋白的酶切。目的蛋白在与镍柱结合时被切割，并进一步被洗脱，留下目的蛋白的His标签和带有His标签的WELQ Protease于柱上。a.利用SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色估计待纯化和酶切的目的蛋白的总量。b.按照常规操作流程将目的蛋白结合至镍柱上。c.使用2-4倍柱体积缓冲液，如50-100mM Tris-HCl，50mM NaCl，5-20mM Imidazole (pH8.0)、50-100mM Na3PO4，50mM NaCl，5-20mM Imidazole (pH7.4)，或者10-20mM K3PO4，50mM NaCl，5-20mM Imidazole (pH7.4)，平衡亲和层析柱2次。d.按照酶切优化实验中确定的蛋白酶/重组蛋白比例，将WELQ Protease加入上一步镍柱平衡用的缓冲液中混匀后，加到柱上。注：如果蛋白酶/重组蛋白比例尚未确定，推荐使用1:20(U/μg)或者1:10(U/μg)的比例。e.在15-30℃中反应适当时间。注：如果反应时长尚未确定，推荐在4-20℃中反应12小时或者过夜。f.收集洗脱下来的目的蛋白。亲和标签和带有His标签的WELQ Protease结合于柱上。常见问题：1.为什么酶切不完全？a.可能是酶与底物蛋白的比例不合适。建议确定待酶切目的蛋白的含量，调整加入WELQ蛋白酶的量。b.可能是孵育时间不够长。建议延长反应时间。c.可能是酶切位点并未表达或发生了突变。建议测序确认序列是否正确。d.可能是酶切位点并未暴露出来。建议尝试使用非离子型变性剂(如0.01-1% Triton X-100/Tween-80)使蛋白发生可逆变性，从而将酶切位点暴露出来。e.可能是缓冲液内含有WELQ蛋白酶的抑制剂。建议将目的蛋白透析至合适的反应缓冲液中。2.为什么会出现不正确的条带？a.可能是目的蛋白上出现了其它类似的酶切位点。建议调整酶切条件(如盐浓度、反应时间或者温度)，降低类似酶切位点的暴露程度。如果待表达纯化的目的蛋白本身含有WELQ序列，就不适合使用WELQ蛋白酶进行酶切了。b.可能是蛋白在菌体内发生降解。建议使用蛋白酶缺陷的菌株。 Aladdin's WELQ Protease specifically recognizes the tetrapeptide sequence Trp-Glu-Leu-Gln (WELQ) and cleaves the peptide bond after Gln (Q), which is commonly used to remove N-terminal His or other tags from recombinant proteins, with the most prominent advantage that the N-terminus of the target protein does not leave any additional amino acid residues after cleavage. WELQ protease is a serine protease-like proteins derived from Staphylococcus aureus [1,2]. It works in a relatively wide temperature range (4-30℃) and pH range (6.5-9.0) and does not require special reaction buffers for its reaction.This WELQ protease with His-tag is particularly suitable for on-column cleavage of His-tagged target proteins. After cleavage, the cleaved His-tag and WELQ protease bind to the His-tag Purification Resin while the target protein with His-tag removed is eluted, which greatly facilitates the purification of target proteins. Alternatively, the WELQ protease and the tag removed from target proteins can also be removed using a nickel column and a purification column for corresponding tags, respectively.Please refer to Figure 1 for the performance of this product. Figure 1. Digestion of GST-tagged proteins using Aladdin's WELQ Protease and a competitor. Fifty micrograms of fusion protein containing the WELQ Protease recognition site (36kD) were incubated with 1 U and 2 U of WELQ Protease in 50mM Tris-HCl (pH 8.0) buffer, respectively, at 4℃ and 25℃. Samples were taken after different time courses as indicated in the figure and subjected to SDS-PAGE electrophoresis, followed by Coomassie Brilliant Blue staining. The digestion products were the target protein of ~10kD and the GST tag of ~26kD. As shown in the figure, this product has comparable enzyme activity to a widely received Competitor. This figure is for reference only, which may vary due to different experimental conditions. This WELQ Protease has a molecular weight of approximately 22kDa and a purity of ≥95%. It is free of DNA endonuclease and exonuclease, RNAase and phosphodiesterase.Unit definition Precautions：* Enzyme activity of WELQ Protease can be partially inhibited by 2M urea or 0.25M guanidine hydrochloride.This product is for R&D only. Not for drug, household, or other uses.For your safety and health, please wear a lab coat and disposable gloves during the operation. Instructions for Use： 1.Optimization of digestion conditions: The exposure extent of the WELQ Protease recognition site, the amino acid sequence near the site and the degree of protein aggregation all affect the digestion effect of WELQ Protease. Thus, it is recommended to optimize the digestion conditions for different proteins from three aspects, reaction temperature (4-30℃), reaction time (1-12h or overnight), and enzyme amount (1:5-1:100 U/μg).a.Set up the reaction as follows: Component Amount Substrate Protein 50μg WELQ Protease (5U/μl)* 0.5/1/2/10U Reaction Buffer** To 50μl * Set the ratio of enzyme to substrate protein to 1:100, 1:50, 1:25, and 1:5 (U/μg), respectively. Except the 1:5 ratio, we recommend diluting WELQ Protease to 0.5 U/μl before use.** We recommend using 10-100 mM Tris-HCl (pH 8.0) as Reaction Buffer. b.Incubate the reaction mix at 15-30℃. After 1, 3, 6 and 12 hours (or overnight) of reaction, respectively, take 10μl of the reaction product for SDS-PAGE analysis. When the reaction time is longer than 16 hours, we recommend incubation at temperature below 20℃.c.After the optimal reaction condition has been determined, the reaction can be scaled up. For on-column digestion, the required enzyme amount needs to be further optimized.2.Enzyme digestion in solution and purificationa.We recommend using 10-100mM Tris-HCl (pH8.0), 10-100mM Na3PO4 (pH7.4), or 10-20mM K3PO4 (pH7.4) as Reaction Buffer.Note: If affinity chromatography is to be performed subsequently, the Reaction Buffer can contain 50mM NaCl and 5-20mM Imidazole.b.Add WELQ Protease and incubate at 15-30℃. Note: If the protein is unstable or the digestion reaction takes longer than 16 hours, incubate the reaction at 4-20℃.c.Add the reaction product to the His-tag Purification Resin ( His-tag Purification Resin10ml P2218 His-tag Purification Resin100ml P2220 His-tag Purification Resin1000ml P2226 His-tag Protein Purification Kit10ml P2229S His-tag Protein Purification Kit10ml P2233-10ml His-tag Purification Resin10ml P2233-100ml His-tag Purification Resin100ml P2233-1000ml His-tag Purification Resin1000ml P2302 PreScission Protease 100U P2303 PreScission Protease 500U P2307 TEV Protease (His-tag) 1000U P2308 TEV Protease (His-tag) 10000U P2310S TEV Protease 1000U P2310M TEV Protease 10000U P2312S SUMO Protease 200U P2312M SUMO Protease 1000U P2312L SUMO Protease 5000U

AI解读

产品规格参数

浓度	5U/μl
储存温度	-20°C储存
运输条件	超低温冰袋运输
稳定性与储存	-20℃保存，至少两年有效。

技术规格说明书

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

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x

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体积（添加到小瓶中）

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÷

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货号 (SKU)	包装规格	是否现货
W751789-500U	500U	期货
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W751789-10KU	10KU	期货

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