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为什么选择此级别
，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
-20°C储存。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)(EMSA/Gel-Shift Binding Buffer,5X)是用于EMSA/Gel-Shift的结合缓冲液。通过EMSA，也称gel-shift，可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的结合情况，从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X)可以用于EMSA研究时细胞核蛋白或纯化的转录因子和特定的双链寡核苷酸的结合反应。EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)中含有poly(dI-dC)，DTT，甘油，EDTA，氯化钠，氯化镁以及Tris等有效成分。其中poly(dI-dC)的浓度经过优化，可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合，同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。本EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)不仅适用于同位素标记的探针，也适用于地高辛(digoxin)或生物素(biotin)标记的探针。每个包装的EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)，足够进行100个蛋白和探针的结合反应。
注意事项：
需自备EMSA相关的所有其它试剂。请仔细阅读完整个说明书后，再开始实验操作。 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：
1. 参考下面的反应体系使用EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X)：(1) 如下设置EMSA结合反应(预期的结果参见图1)：阴性对照反应： Nuclease-Free Water7μl EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子0μl 标记好的探针1μl 总体积10μl 样品反应： Nuclease-Free Water5μl EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子2μl 标记好的探针1μl 总体积10μl 探针冷竞争反应： Nuclease-Free Water4μl EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子2μl 未标记的探针1μl 标记好的探针1μl 总体积10μl 突变探针的冷竞争反应： Nuclease-Free Water4μl EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子2μl 未标记的突变探针1μl 标记好的探针1μl 总体积10μl Super-shift反应： Nuclease-Free Water4μl EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子2μl 目的蛋白特异抗体1μl 标记好的探针1μl 总体积10μl (2)按照上述顺序依次加入各种试剂，在加入标记好的探针前先混匀，并且室温(20-25℃)放置10分钟，从而消除可能发生的探针和蛋白的非特异性结合，或者让冷探针优先反应。然后加入标记好的探针，混匀，室温(20-25℃)放置20分钟。 (3)加入1微升EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色，10X)，混匀后立即上样。注意：有些时候溴酚蓝会影响蛋白和DNA的结合，建议尽量使用无色的EMSA/Gel-Shift上样缓冲液。如果对于使用无色上样缓冲液在上样时感觉到无法上样，可以在无色上样缓冲液里面添加极少量的蓝色的上样缓冲液，至能观察到蓝颜色即可。 2. 电泳分析：EMSA的典型分析结果可以参见下面的图1。 图1.一个典型的EMSA/Gel-Shift分析图 1,阴性对照反应(标记探针)；2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)； 3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针+标记探针100倍量的未标记探针)； 4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针+标记探针100倍量的未标记突变探针)； 5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针+目的转录因子的特异抗体)。EMSA/Gel-Shift Binding Buffer (5X) is the binding buffer for EMSA/Gel-Shift assay which is generally used to study protein-DNA interactions and to detect the activation level of transcription factors in cells. EMSA/Gel-Shift Binding Buffer (5X) can be used in EMSA for the binding of nuclear proteins or purified transcription factors to specific double-stranded oligonucleotides.This product contains active ingredients such as poly(dI-dC), DTT, glycerol, EDTA, NaCl, MgCl2 and Tris. The concentration of poly(dI-dC) has been optimized to eliminate non-specific bindings without affecting the specific binding between target transcription factor and the labeled probe.This product is not only suitable for isotope-labeled probes, but also for digoxin or biotin-labeled probes.This product is sufficient for 100 binding reactions between protein and probe.
Precautions：
All other reagents related to EMSA are not provided in this product.Please read the entire manual carefully before starting the experiment.This product is for R&D only. Not for drug, household, or other uses.For your safety and health, please wear a lab coat and disposable gloves during the operation.Instructions for Use：
1. Set up the following reactions by adding the reagents in sequence. Please refer to Figure 1 for the assay results. Negative Control ReactionNuclease-Free Water7µlEMSA/Gel-Shift Binding Buffer (5X)2µlNuclear Protein or Purified Transcription Factor0µlLabeled Probe1µlTotal Volume10µlCold Probe Competition ReactionNuclease-Free Water4µlEMSA/Gel-Shift Binding Buffer (5X)2µlNuclear Protein or Purified Transcription Factor2µlUnlabeled Probe 1µlLabeled Probe1µlTotal Volume10µl Super-shift ReactionNuclease-Free Water4µlEMSA/Gel-Shift Binding Buffer (5X)2µlNuclear Protein or Purified Transcription Factor2µlTarget Protein Specific Antibody1µlLabeled Probe1µlTotal Volume10µl Sample ReactionNuclease-Free Water5µlEMSA/Gel-Shift Binding Buffer (5X)2µlNuclear Protein or Purified Transcription Factor2µlLabeled Probe1µlTotal Volume10µl Cold Mutation Probe Competition ReactionNuclease-Free Water4µlEMSA/Gel-Shift Binding Buffer (5X)2µlNuclear Protein or Purified Transcription Factor2µlUnlabeled Probe1µlLabeled Probe1µlTotal Volume10µl2. Before adding the labeled probe, the reaction mix should be mixed well and incubated at room temperature (20-25℃) for 10 minutes to eliminate possible non-specific bindings between probes and proteins. Otherwise allow cold probes react preferentially. After adding the labeled probe, mix well and incubate at room temperature (20-25℃) for 20 minutes.3. Add 1μl of EMSA/Gel-Shift Loading Buffer (colorless, 10X) into each reaction, mix well and load the mixture immediately on a gel. Note: Sometimes bromophenol blue can affect protein-DNA interactions. It is recommended to use the colorless EMSA/Gel-Shift Loading Buffer, or that including a very small amount of blue loading buffer to make observation easier.4. Electrophoresis analysis:Figure 1. The typical EMSA result analyzed with ’s EMSA/Gel-Shift Kit . 1. Negative Control Reaction (labeled probe); 2. Sample Reaction (nucleoprotein containing activated target transcription factor + labeled probe); 3. Cold Probe Competition Reaction (nucleoprotein containing activated target transcription factor + labeled probe + unlabeled probe 100 times the amount of labeled probe); 4. Cold Mutant Probe Competition Reaction (nucleoprotein containing activated target transcription factor + labeled probe + unlabeled mutant probe 100 times the amount of labeled probe); 5. Super-shift Reaction (nucleoprotein containing activated target transcription factor + labeled probe + specific antibody of target transcription factor).规格
规格或纯度
5X
稳定性与储存
-20℃保存，一年有效。
英文名称
EMSA/Gel-Shift Binding Buffer
储存条件
-20°C储存
运输条件
超低温运输
产品线
biological_products
名称和识别符
分子类型
生物试剂/缓冲液
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
输入批号以搜索分析图谱:
技术文档和文章
溶液计算器
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