产品描述

应用：用于用 2‑氨基苯甲酰胺酸 (2‑AB) 标记游离聚糖。

描述：该试剂盒包含用于将染料与聚糖的游离还原端偶联的试剂通过还原胺化反应。

染料特性：质量 = 136.15

                  荧光， ex = 250 nm， em = 428 nm。

样品数量每组标记试剂 12 个单独的分析样品（共 24 个样品用于成套工具）

每个样品的样品量从 25 pmol 到 25 nmol 聚糖。

合适的样品可以标记任何带有游离还原末端的纯化聚糖。

结构完整性唾液酸、岩藻糖、硫酸盐或磷酸盐没有可检测到（< 2 摩尔%）的损失。

贮存：在室温下避光保存。远离热源、光源和水分。试剂自生产之日起至少两年内是稳定的。

船运：该产品可以在环境温度下运输。

处理：确保使用的任何玻璃、塑料制品或溶剂不含糖苷酶和环境碳水化合物。使用无粉手套进行所有样品处理  程序并避免污染环境碳水化合物。所有涉及标记试剂的步骤都必须在干燥的环境中进行玻璃器皿和塑料器皿。一旦打开单个试剂瓶，其内容物应立即使用，过量后根据当地安全规定丢弃。

安全：仅供研究使用。不用于人类或药物使用

 
套件内容

需要额外的试剂和设备

•  Milli Q水或类似的

• 加热块、烤箱或类似的干式加热器（不能使用水浴）设置为 65°C

• 离心蒸发器（例如 Savant、Heto 或类似的）

• 反应瓶（例如聚丙烯微量离心瓶）

• 注意：如果进行可选的标记后样品净化，则需要更多试剂

标签的时间线

标记过程需要 2 小时，而实际标记孵育仅需 1 小时。

标注方法

1纯化聚糖：如有必要，从样品中去除非碳水化合物污染物。

2将样品转移到反应瓶中：该试剂盒设计用于每次反应最多标记 25 nmol 的聚糖。在随后的 HPLC 分析中，每个反应可以标记和检测低至 5 pmols 的单一纯聚糖。合适的反应瓶包括小型聚丙烯微量离心管和 PCR 工作管。

3干燥样品并重新溶解在 10 µL 水中：如果样品体积超过 10 µL，请干燥样品。如果样品需要干燥，则应使用离心蒸发器进行干燥。如果无法做到这一点，则可以谨慎使用冷冻干燥（冻干）（尤其要确保样品在小瓶底部干燥成小而致密的物质）。不要让样品受到高温度 (>28°C) 或极端 pH 值，因为这些条件会导致唾液酸在酸催化下损失酸（高温，低 pH）或聚糖还原末端的差向异构化（在高 pH 条件下）。 样品干燥后，将聚糖重新溶解在 10 μL 水中。

4准备标记试剂：将 150 µL 试剂盒组分30% 乙酸的 DMSO 溶液添加到一小瓶染料（并通过吸管作用混合直至染料溶解。有时需要加热（30‑60°C）来帮助溶解染料。将 150 µL 溶解的染料溶液转移到一瓶还原剂中并通过移液器动作混合直到还原剂溶解。有时需要加热（30‑60°C）来帮助溶解还原剂。

5向样品中添加标记试剂：向每个聚糖样品中加入 10 µL 标记试剂，盖上微量管，充分混匀，然后轻轻轻敲以确保标记溶液位于小瓶底部。

6孵化：将反应瓶放入加热块、沙盘或设置为 65°C 的干燥烘箱中并孵育 1 小时。样品必须完全溶解在标记溶液中才能有效标记。鼓励完全溶解 样品可以在 65°C 孵育开始后涡旋 10 分钟，然后孵化继续。

7离心并冷却：孵育期后取出样品，短暂离心微管，然后让它们完全冷却至室温。

2AB 标记聚糖的分析

2‑AB 标记的聚糖可以通过多种不同的分析方法进行研究，包括HPLC、凝胶电泳和质谱。

高效液相色谱分析

2‑AB 标记的聚糖混合物可以通过各种 HPLC（高压力液相色谱）方法：

分析类型

分离带电和中性聚糖

中性和带电聚糖的轮廓分析中性聚糖的分离

N 色谱柱是用于纯化和分析的特别强大的工具来自复杂聚糖混合物的标记寡糖。

酶学分析

适用于 N 和 O 连接的标记聚糖的结构分析的高纯度测序级酶（例如外切糖苷酶）可从许多公司获得。

选择糖苷酶时要特别小心，选择那些配方与您的特定应用程序。例如，一些酶和酶缓冲液含有干扰通过某些类型的分析。

质谱和电泳

标记的聚糖也可以通过质谱、电泳和各种类型进行分析的光谱学。

还原胺化反应

标记反应涉及两步过程

1.席夫碱基阵型。

这需要具有自由还原末端的聚糖，该末端在闭环（环状）之间保持平衡和开环（无环）形式。染料的伯氨基对染料进行亲核攻击无环还原末端残基的羰基碳形成部分稳定的席夫碱。

2.减少席夫碱。

席夫碱基亚胺基团被化学还原以产生稳定的标记聚糖。

通过还原胺化用 2‑氨基苯甲酰胺酸 (2‑AB) 标记聚糖

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