名称：2,3-二羟基-1,4-二硫醇丁烷（DTT）； 
MW：154.25；  
cas #： 3483-12-3； 
溶解性：水、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、乙醚 
储存：收到产品后，请在室温下密封保存，以防氧化。

        二硫苏糖醇是化合物 2,3-二羟基-1,4-二硫醇丁烷的反式异构体。DTT 又称克莱兰试剂（Cleland's Reagent），是一种细胞渗透性强而温和的还原剂，在 pH 值为 7 时的氧化还原电位较低，为-0.33 V（最佳 pH 值范围为 7.1 至 8.0）。这使它能够还原几乎所有可接触到的生物二硫化物，并保护游离硫醇不被氧化。

        二硫苏糖醇还原含二硫化物的反应分为两个步骤。首先，二硫苏糖醇在可逆反应中与目标分子形成混合二硫化物，将一个硫还原为相应的巯基。在第二步中，DTT 的分子内环化作用会产生一种在能量上有利的六元环状二硫化物。这促使反应完成，还原了原始二硫键的第二个硫。因此，与单硫醇还原剂（如谷胱甘肽或 2-巯基乙醇）相比，DTT 所需的浓度要低得多。后者通常需要过量才能完全还原目标化合物。

图 1. 用 DTT 还原有机二硫键。

应用 
        • 二硫苏糖醇通常用于还原肽和蛋白质中的二硫键。然而，与所有还原剂一样，DTT 只能还原可触及的二硫键。
        • 低浓度的 DTT 可用于稳定具有游离硫醇基团的蛋白质。相反，高浓度的 DTT 可用于蛋白质变性，例如在进行 SDS-PAGE 分析之前。

建议使用的DTT浓度

还原蛋白质或肽溶液中半胱氨酸的一般方案

        • 用清水配制 1M 的二硫苏糖醇 DTT 储存液，最好是新鲜的（尽量不要吸入 DTT）。
        • 将 DTT 加入蛋白质或多肽溶液（在缓冲液中），最终浓度为 1mM 至 10mM。孵育 10 分钟至 30 分钟。如果在较高温度（如 37 摄氏度或 56 摄氏度）下孵育，还原效果可能会稍好一些。

烷基化前还原溶液中的蛋白质或肽
        • 按上述方法还原蛋白质。
        • 孵育二硫还原的蛋白质或肽样品，其 NEM 摩尔数至少是 DTT 所用 NEM 摩尔数的 3 倍。孵育 30 分钟至 1 小时。
        • 如果需要，透析掉 DTT 或 NEM。

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