ADAM9 小鼠单克隆抗体：操作规程与应用指南
ADAM9 小鼠单克隆抗体：操作规程与应用指南
ADAM9 Mouse mAb是一种靶向人ADAM9蛋白的鼠源单克隆抗体，以PBS为制剂，专为在多种免疫学应用中可靠检测ADAM9蛋白而设计。
- 产品货号
- Ab351140
- 克隆来源
- 鼠单克隆
- 制剂
- PBS（磷酸盐缓冲液）
- 靶抗原
- ADAM9（解整合素金属蛋白酶9）
- 供应商参考编号
- absea #KC-8411
- 推荐储存条件
- 短期储存于4°C；长期储存于-20°C；避免反复冻融
背景：ADAM9生物学与抗体概述
ADAM9（解整合素金属蛋白酶9），又称MDC9或Meltrin-γ，是ADAM家族跨膜及分泌型锌依赖性金属蛋白酶的成员之一。ADAM9参与膜锚定蛋白的胞外域脱落、细胞黏附及细胞-基质相互作用，与肿瘤侵袭、血管生成和组织重塑密切相关，因此成为肿瘤学和细胞生物学研究的重要靶点。
ADAM9 Mouse mAb（Ab351140，absea #KC-8411）是一种针对人ADAM9蛋白制备的鼠源IgG单克隆抗体，以PBS为制剂，批次间特异性稳定，适用于研究人细胞系及组织中ADAM9表达与功能的科研人员。
样品制备与推荐实验方案
细胞和组织裂解液制备（蛋白质印迹法）：
- 在冰上用刮刀或胰蛋白酶收集细胞，用冰冷PBS洗涤两次。
- 用含蛋白酶抑制剂混合物和1 mM PMSF的RIPA裂解液在冰上裂解30分钟。
- 于4°C、12,000 × g离心15分钟，收集上清液。
- 用BCA或Bradford法测定蛋白浓度，每泳道上样20–40 µg总蛋白。
- 经SDS-PAGE（8–12%聚丙烯酰胺凝胶）分离后转印至PVDF或硝酸纤维素膜。
- 用含5%脱脂奶粉的TBST于室温封闭1小时。
- 按推荐工作稀释比例（见关键参数；以说明书为准）孵育ADAM9 Mouse mAb，4°C过夜。
- 用TBST洗涤3次，每次10分钟，然后在室温孵育适当的HRP标记抗鼠二抗1小时。
- 再洗涤3次，每次10分钟，用ECL底物显色。
组织切片制备（IHC-P）：
- 将组织置于10%中性缓冲福尔马林中固定，石蜡包埋，切4–6 µm切片。
- 脱蜡后经梯度酒精复水。
- 在10 mM柠檬酸缓冲液（pH 6.0）中用压力锅或微波炉进行抗原修复10–20分钟。
- 用3% H₂O₂封闭内源性过氧化物酶10分钟，再用5%正常血清封闭30分钟。
- 在适当稀释比例下加入ADAM9 Mouse mAb，于湿盒中4°C孵育过夜。
- 按IHC试剂盒说明书操作二抗及显色步骤，苏木精复染，封片后成像。
储存、操作及质量注意事项
储存条件：ADAM9 Mouse mAb（Ab351140）以PBS为制剂。短期使用（不超过1个月）时，储存于4°C。长期储存时，分装后置于-20°C保存。避免反复冻融，以防抗体变性、活性降低。请勿储存于无霜冰箱。
操作：开盖前短暂离心小瓶以收集液体。稀释时在冰上操作，使用无菌、低蛋白结合管，以减少因吸附导致的损失。
质量：作为鼠单克隆抗体，ADAM9 Mouse mAb具有高重复性和表位特异性。每次实验均应设置阳性和阴性对照。在检测未知样品前，应使用经确认表达ADAM9的阳性对照细胞系或组织验证实验方案。
故障排查
以下表格可帮助诊断和解决使用ADAM9 Mouse mAb时常见的问题：
| 问题 | 可能原因 | 建议解决方案 |
|---|---|---|
| 蛋白质印迹无信号 | 抗体稀释倍数过高；抗原量不足；转印不完全 | 降低抗体稀释倍数；增加蛋白上样量；用丽春红S染色验证转印效果 |
| 背景过高 | 封闭不充分；二抗交叉反应；抗体浓度过高 | 延长封闭时间或改用5% BSA；滴定一抗；增加TBST洗涤次数 |
| 多条非特异性条带 | 蛋白酶降解；抗体交叉反应 | 确保裂解液中含新鲜蛋白酶抑制剂；对照预期ADAM9分子量确认条带位置 |
| IHC信号弱 | 抗原修复不充分；抗体稀释倍数过高 | 优化抗原修复时间/方法；降低抗体工作稀释比例 |
| 抗体活性丧失 | 反复冻融；储存不当 | 收货后立即分装；储存于-20°C；避免使用无霜冰箱 |
常见问题
ADAM9 Mouse mAb（Ab351140）经过验证的应用有哪些？
请以产品说明书为准，查阅完整且最新的经验证应用列表。此类抗体的典型应用包括蛋白质印迹法（WB）、石蜡切片免疫组织化学（IHC-P）及免疫荧光（IF）。如需确认具体经验证的应用，请联系Aladdin Scientific客服或参阅产品说明书。
ADAM9 Mouse mAb的推荐储存条件是什么？
ADAM9 Mouse mAb以PBS为制剂。短期使用时储存于4°C，长期储存时置于-20°C。收货后应立即分装，以避免反复冻融，重复冻融会显著降低抗体性能。
使用ADAM9 Mouse mAb时应选择哪种二抗？
由于ADAM9 Mouse mAb为鼠源单克隆抗体，应使用与适当报告基团偶联的抗鼠二抗（例如，用于蛋白质印迹法或DAB显色IHC的HRP标记二抗，或用于免疫荧光的荧光素标记二抗）。请确保二抗宿主物种不是小鼠，以避免交叉反应。
该抗体检测到的ADAM9预期分子量是多少？
ADAM9的分子量约为90–110 kDa，具体取决于翻译后修饰和加工方式；然而，糖基化和脱落事件可能改变其在SDS-PAGE上的表观分子量，因此应以官方产品说明书为准确认预期条带大小。
ADAM9 Mouse mAb能否用于免疫沉淀（IP）？
所提供的资料中未明确确认该抗体适用于免疫沉淀。请参阅最新产品说明书或联系Aladdin Scientific技术支持，以确认Ab351140是否经过IP应用验证。
参考文献
- Mochizuki S, Okada Y. ADAMs in cancer cell proliferation and progression. Cancer Sci. 2007;98(5):621-628.
- Edwards DR, Handsley MM, Pennington CJ. The ADAM metalloproteinases. Mol Aspects Med. 2008;29(5):258-289.
产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。
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