1.PEG胺与NHS酯的偶联反应

反应条件1：DMF、CH2Cl2、DMSO、THF；基质：茶、DIPEA
反应条件2：PBS缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液，pH 8.5

        1） 在连续搅拌下，根据反应动力学，将含NHS的化合物以1:1或2:1当量的mmol加入上述反应混合物中。
        2） 根据底物性质，将反应混合物搅拌3-24小时，通过LC-MS或TLC板监测。
        3） 最终产物可以通过一般的有机合成处理或柱纯化来分离。

2.酸与胺PEG的偶联反应

反应条件：EDC（或DCC、HATU等） 、 DMF（或CH2Cl2、DMSO、THF）、碱：TEA（或DIPEA、Py）

        1.打开瓶子前，将EDC和羧酸平衡至室温。
        2.通过将100mg每种试剂（~100µL）溶解在所需量的干燥水溶性溶剂（如DMF或DMSO）中来制备羧酸储备溶液。
        3.按照重要产品信息部分的指示，盖上、储存和处理储备溶液。
        4.将适量的EDC和含胺分子加入活化缓冲液中适量的羧化表面，并在室温下反应15分钟。

3.添加DTT以熄灭EDC。注意：对于易于清洗的表面，可以跳过淬火步骤，用偶联缓冲液清洗表面，以去除任何残留的EDC和NHS。
4.将在共轭缓冲液中制备的羧酸混合物加入活化表面，并在室温下反应2小时。
5.为淬灭反应，加入羟胺或另一种含胺缓冲液。羟胺水解固体表面上未反应的NHS，导致异羟肟酸盐的形成。其他淬灭方法包括添加Tris、赖氨酸、甘氨酸或乙醇胺；然而，这些含伯胺的化合物会修饰羧基。
(注：可通过重复步骤 4 和 5 对新引入的羧基进行进一步修饰）
6.将在偶联缓冲液中制备的所需含胺底物加入活化表面，并在室温下反应2小时。
7.按照步骤7所述淬灭反应。

3. 在 MES 缓冲溶液中使用胺-PEG 制酸的一般程序

反应条件：0.5M MES缓冲液pH 5.5；EDC。HCl、NHS

        将RCOOH（1mmol）溶解在0.5M MES pH 5.5缓冲液（1mL）中；向溶液中加入EDC（1.2mmol），搅拌反应10分钟。随后，向反应中加入NHS（10mmol）。将反应物在室温下搅拌60分钟。然后加入胺-PEG（2mmol），在室温下将反应物搅拌12小时。

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