B 细胞表面有许多膜分子，包括细胞表面分化抗原和模型免疫球蛋白（smlg），在分化的不同阶段和不同的定居位置，B 细胞表达的表面分子不尽相同，因此可以根据表面分子的不同来判断 B 细胞分化的阶段和功能状态。

原理

B 细胞表型检测基本原理是 B 细胞表面有许多膜分子，包括细胞表面分化抗原和模型免疫球蛋白（smlg），在分化的不同阶段和不同的定居位置，B 细胞表达的表面分子不尽相同，因此可以根据表面分子的不同来判断 B 细胞分化的阶段和功能状态。

操作方法

多色流式细胞术检测B细胞表型

原理

B 细胞表型检测基本原理是利用 B 细胞表面膜分子，包括细胞表面分化抗原和模型免疫球蛋白（smlg），在分化的不同阶段和不同的定居位置，B 细胞表达的表面分子不尽相同，因此可以根据表面分子的不同来判断 B 细胞分化的阶段和功能状态。

材料与仪器

试剂：
（1）NP-KLH
（2）Ribi 佐剂
（3）0.14 mol/L NH，Cl、Hanks 液
（4）染色缓冲液（1xPBS＋0.1％ BSA＋0.05％ 叠氮钠）
（5）布雷菲德菌素 A（Brefeldin A，BFA）或莫能霉素（Monensin）
（6）mAb
仪器：
（1）流式细胞仪
（2）离心机
（3）滤网、注射器等

步骤

B 细胞表型检测的基本过程可分为以下几步（以小鼠为例，主要阐述应用多色流式细胞术检测 B 细胞的表面分子，分析 B 细胞的表型和功能，鉴定 B 细胞的分化不同阶段以及记忆性 B 细胞的亚群。）：
（1）制备检测 B 细胞所需的单个核细胞悬液

1）免疫小鼠：

①使用 400 μg NP-KLH 溶于 Ribi 佐剂，腹腔免疫 6～10 周龄 C57BL/6J 小鼠；

②初次注射至少 6 周后，再次用同样的方法免疫该小鼠；

③可在加强免疫 1 周后处死小鼠，检测 B 细胞。

2）制备细胞悬液：

颈椎脱臼法处死小鼠，取脾脏，滤网碾磨后裂解红细胞，用 Hanks 液重悬，调整细胞浓度为 2x106/ml。

选择合适的刺激剂体外刺激细胞，特异性活化 B 细胞；如果要检测细胞因子的表达，同时加入阻断剂 BFA（检测 IL-10 时，用莫能霉素）。

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