严格无菌技术取静脉血 3-5 ml 注入血培养瓶后立即送实验室，放 35℃ 孵育 7 天，送实验室之前，不可放冰箱暂存。取血注入厌氧瓶时，要注意勿将注射器内的空气注入瓶内，否则会破坏瓶内的无氧状态。实验室接到送检的血培养瓶后，按以下方法处理。本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

血液及骨髓标本的细菌接种试验

原理

严格无菌技术取静脉血 3-5 ml 注入血培养瓶后立即送实验室，放 35℃ 孵育 7 天，送实验室之前，不可放冰箱暂存。取血注入厌氧瓶时，要注意勿将注射器内的空气注入瓶内，否则会破坏瓶内的无氧状态。实验室接到送检的血培养瓶后，按以下方法处理。

步骤

实验步骤

1、血培养瓶经 12-18 h 35℃ 孵育后，在血平板或巧克力平板上盲目传种一次。这种方法可提早检出阳性标本。

2、盲目传种后，培养瓶继续孵育至第 7 天，每日早晨取出检查有无生长，并摇匀培养液续孵。下列几种情况提示细菌生长。

（1）均匀混浊，发酵葡萄糖产生气泡。

（2）微混浊有绿色变化。

（3）血球层上面出现颗粒状或絮状沉淀物生长，或自下而上的严重溶血。

（4）混浊并有胶冻状凝固，瓶壁有颗粒状粘附。

（5）表面有菌膜，菌环状生长，下呈混浊。

3、肉眼见有细菌生长，做如下处理：

（l）取生长物涂片，做革兰氏染色。

（2）取生长物做药敏试验（直接试验）。

（3）取生长物做相应的生化鉴定。

（4）取生长物移种血平板，巧克力和中国兰/麦康凯/伊美兰平板。根据革兰氏染色所见结果应及时报告临床医师。

根据革兰氏染色的结果，以培养瓶内培养液为菌液，做直接法药物敏感性测定，争取在较短时间内得出初步结果，供临床医师作为治疗的参考。标本经平板分离纯培养后，做标准化药敏试验，正式报告给临床医师。

涂片结果证实为一种细菌生长，则可直接以增菌液做鉴定试验。如有二种或多种细菌同时生长，则必须经过分离培养，以获得纯菌后做鉴定。

4、无细菌生长表现的培养瓶，在观察的 7 天中，最少应作 2 次盲目传种。7 天仍未见生长，报告阴性。如可疑布氏杆菌时可培养 28 天，可疑军团病菌时可培养 10 天。

5、需氧菌培养可转种到血平板或巧克力平板。用血平板可观察到细菌溶血的情况，但可能丢失嗜血杆菌。如用巧克力平板，不仅嗜血杆菌可生长，脑膜炎奈瑟菌生长也好。转种巧克力平板需放 CO2 环境中。

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