支原体（Mycoplasma）兼具致病性与高度隐匿性，在临床领域可引起呼吸道和泌尿生殖道感染，在细胞培养体系中则是最常见的隐性污染源之一。系统理解其生物学特性，并在实验室中建立“检测–去除–预防–环境治理”的闭环管理，是保障细胞实验与相关产品质量的关键环节。

一、支原体概述

1.1基本生物学特性

（1）形态与结构

支原体是一类无细胞壁的小型原核微生物，外层仅由含固醇的脂质双分子层细胞膜构成。由于缺乏肽聚糖细胞壁，其形态高度多变，可呈球形、杆状、丝状或分枝状，直径一般在0.1–0.3 μm，可通过部分0.45 μm孔径细菌滤器，是目前已知能够独立生长的最小自由生活原核生物之一。细胞膜中胆固醇等甾醇成分有助于维持膜稳定性和抗剪切、抗渗透压变化能力。

（2）基因组与代谢特征

支原体基因组体积小，约为0.6–1.4 Mb，仅编码有限数量的代谢与结构蛋白，缺乏细胞壁合成相关基因及多条完整代谢通路。能量代谢主要依赖糖酵解或精氨酸分解等简化途径，缺乏完整三羧酸循环和典型呼吸链系统，对外源胆固醇、脂肪酸、氨基酸和核苷酸等营养依赖性强。生长速度相对缓慢，代时通常为1–6小时。

1.2理化性质与药物敏感性

（1）理化特性

支原体通常表现为革兰氏阴性，姬姆萨染色可见淡紫色小菌体。多数菌株最适生长温度为35–37℃，适宜pH范围为7.0–8.0，对渗透压变化较为敏感。对干燥和热较不耐受，在适当温度条件下可较快灭活；对75%乙醇和常用含氯消毒剂敏感，而在低温（如-20℃）环境中可较长时间存活。

（2）抗生素敏感性

由于缺乏肽聚糖结构，支原体对青霉素类、头孢菌素类等抑制细胞壁合成的抗生素天然耐药。常用的有效药物主要包括大环内酯类、四环素类和喹诺酮类，其靶点多为蛋白合成或DNA复制相关结构。随着耐药突变的出现，部分地区肺炎支原体和泌尿生殖道支原体对大环内酯类的耐药率逐渐升高，需要结合耐药监测优化用药策略。

二、支原体的分类与致病/污染相关种

2.1分类框架

（1）柔膜体纲中的支原体及相关类群

支原体隶属于柔膜体纲（Mollicutes），其中与人类、动物疾病及实验室相关性较高的主要为支原体属（Mycoplasma）和脲原体属（Ureaplasma）。支原体属内包含多种人类呼吸道和泌尿生殖道病原体，也包括常见的细胞培养污染菌种；脲原体属常定植于泌尿生殖道，可参与局部炎症过程，并可在体外培养体系中存活。

2.2常见致病及实验室污染相关种

（1）临床相关病原种

肺炎支原体以呼吸道上皮细胞为主要宿主靶点，可引起咽炎、支气管炎和社区获得性肺炎；泌尿生殖道相关的解脲脲原体、人型支原体和生殖支原体则与非淋菌性尿道炎、宫颈炎、盆腔炎、不孕及不良妊娠结局等相关。其致病基础包括黏附蛋白介导的定植、毒性代谢产物和免疫介导的组织损伤。

（2）细胞培养与畜牧相关种

在细胞培养和畜牧养殖中，常见的污染及致病种包括口腔来源的支原体、精氨酸支原体等，它们可在培养体系中长期存在，消耗营养并改变细胞外环境，对细胞增殖、代谢及功能实验造成干扰。在畜禽中，还可引起慢性呼吸道疾病、关节炎和产量下降等问题。

三、支原体在实验室细胞培养中的危害

3.1污染来源与隐匿特征

（1）主要污染途径

支原体污染细胞培养体系的途径包括：新引入细胞株或原代细胞自身携带污染；未检测的血清、胰酶和部分生物制品中存在支原体；操作过程中的气溶胶、滴落或交叉污染；培养箱、操作台和常用器具表面的残留污染。

（2）隐性污染特点

与常规细菌相比，支原体不易造成培养液明显浑浊，也不会在短时间内造成细胞大规模坏死，因而往往在较长时间内不被注意。若缺乏系统的常规检测，污染可在多个细胞系和多个培养箱之间缓慢扩散，最终影响整个实验平台的数据可靠性。

3.2对细胞和实验结果的影响

（1）细胞水平的生物学影响

支原体可附着在细胞表面或在细胞外长期存活，竞争性消耗培养基中的营养物质，产生代谢废物，干扰细胞的能量代谢和内环境稳态，导致生长速度下降、形态异常、贴壁能力改变和凋亡/坏死率变化；对长期传代细胞，还可能促进遗传漂移和基因组不稳定。

（2）实验数据与产品质量风险

在功能学和多组学研究中，支原体污染会改变转录组、蛋白组和代谢组特征，干扰信号通路分析和药物作用机制研究；在抗体药物、疫苗或细胞治疗产品制备中，支原体阳性不仅影响产品质量，还不符合相关法规要求，可能导致整个批次的生产失败或需重新验证。

四、支原体检测策略

4.1检测总体思路

（1）从“疑似时检测”转向“周期性质控”

在现代细胞实验室中，支原体检测应被纳入常规质量控制流程：所有新入库细胞需要完成支原体检测；在长期维护的核心细胞系上，需要设定固定检测间隔；在关键实验或放行前，应再次确认细胞支原体阴性状态，以保障数据和产品的可靠性。

（2）多技术组合提升稳健性

支原体检测技术包括培养法、荧光染色法、PCR/实时PCR以及基于酶学反应的信号读出方法等。通过将快速高通量检测方法与高特异性验证技术组合应用，可在保证灵敏度和特异性的前提下，提高检测工作效率和可追溯性。

4.2快速检测技术

（1）发光信号检测

基于发光信号的支原体检测方法常通过核酸或酶促反应耦合，将检测结果转化为发光强度，适合在多孔板体系中进行批量筛查。其优势体现在检测速度快、操作自动化程度高、适合对大规模样本进行常规监控，特别适用于细胞库、种子批次和关键实验前的快速放行检测。

（2）荧光信号检测

荧光法支原体检测可通过特异性染料或核酸扩增产物的荧光读出实现，检测周期短，可在较短时间内给出结果。部分方法还可以通过显微镜观察荧光信号的分布情况，直观判断污染程度。该类方法适合作为日常巡检或对可疑样本进行复核。

4.3通用检测方案

通用型支原体检测试剂多针对支原体属和脲原体属的保守靶点设计，可覆盖多种支原体污染情形，适用于哺乳动物细胞系、原代细胞及部分微生物样本。操作流程通常较简化，便于在不同实验室条件下开展常规支原体监控。

五、支原体去除与环境治理

5.1细胞内支原体去除策略

（1）细胞去留决策原则

当细胞被检测为支原体阳性时，应首先根据细胞的重要性和可替代性进行判断：对于常用、易替代的细胞系，优先选择弃用并从经过严格检测的细胞库重新复苏；对于临床来源样本、高度工程化细胞或难以重复获得的材料，可在充分评估下采用化学或生物学去除方案。

（2）多轮去除与持续监测

使用专门的支原体去除试剂在多个传代周期中处理污染细胞，是实验室中常用的细胞内清除策略。处理过程中需要密切观察细胞的形态、增殖速度和存活率，以避免对细胞造成不可逆损伤。完成一个疗程后，应在不同时间点使用敏感度较高的检测技术进行多轮复检，以确认支原体已被彻底清除。

5.2实验环境与表面污染治理

（1）环境残留的隐性风险

即便细胞内支原体被清除，若培养箱内壁、生物安全柜工作台、移液器外表面、门把手等关键接触部位存在支原体残留，也可能在后续操作中重新污染细胞。因此，环境治理与细胞内清除必须协同进行。

（2）针对支原体的环境处理方案

在常规使用75%乙醇和含氯消毒剂的基础上，可采用专为支原体设计的环境去除产品，对培养箱内壁、搁板、气道区域以及操作台面进行定期喷洒或擦拭处理，以增强对支原体的杀灭效果。结合定期高温或紫外灭菌，可以进一步降低环境中支原体的残留风险。

六、相关产品信息一览

          支原体以其体积极小、代谢简约和高度隐匿性，在临床和实验室体系中都构成持续风险。通过系统了解其生物学特性并结合多种检测、清除、预防与环境治理方案，可在实验室层面有效降低支原体相关风险，提升细胞实验和相关产品的可靠性与安全性。