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缓冲液配制指南

Buffer配方


1.0 mol/L TrisHCl(pH 6.8)

Tris 30.28 g
超纯水 200 mL

        溶解后,用浓盐酸调pH至6.8,最后用超纯水定容至250 mL,高温灭菌后室温下保存。 


1.5mol/L TrisHCl(pH 8.8)

Tris 45.43 g
超纯水 200 mL

        溶解后,用浓盐酸调pH至8.8,最后用超纯水定容至250mL,高温灭菌后室温下保存。 


10% SDS

        取SDS 10g,加蒸馏水至100 mL, 50 ℃水浴下溶解,室温保存。如在长期保存中出现沉淀,水浴溶化后,仍可使用。


10% 过硫酸胺(APS)

        取过硫酸胺 0.1 g ,加超纯水1.0 mL 溶解后,4 ℃保存,保存时间为1周。(-20 ℃长期保存)


30% 丙烯酰胺

丙烯酰胺 29 g
N,N’-亚甲双丙烯酰胺 1gspan>

        溶于总体积为50 mL的水中,定容至100 mL。室温保存于棕色瓶。 


10× PBS(2L)

NaCl 160 g
KCl 4 g
Na2HPO4·12H2O 22.9 g
KH2PO4 4 g
dH20 1 L

        NaOH调pH值至7.4,定容至2 L。保存于室温。 


还原型5×SDS上样缓冲液

0.5 mol/L TrisHCl(pH6.8) 2.5 mL
二硫苏糖醇(DTT) 0.39 g
SDS 0.5 g
溴酚蓝 0.025 g
甘油 2.5 mL

        混匀后,分装于1.5 mL离心管中,4 ℃可保存数周,-20 ℃可长期保存。 


电泳液缓冲液

Tris 3.03 g
甘氨酸 18.77 g
SDS 1 g

        加蒸馏水溶解定容至1000 mL室温保存,1次溶液可重复使用3~5 次。 


转移缓冲液


1X电转液:

甘氨酸 11.25 g
Tris 2.375 g
SDS 0.375 g
甲醇 200 mL

        加蒸馏水溶解定容至1000 mL 溶解后4 ℃保存,1次溶液可重复使用3~5次。 


TBS缓冲液

NaCl 8.5 g
Tirs 1.2 g

        加蒸馏水溶解,冰醋酸调pH至7.2,定容至1000 mL。室温保存。 


洗脱液TBST溶液

        TBS溶液1000 mL ,1 mL吐温20,混匀后即可使用,最好现用现配。


封闭液(含5%脱脂奶粉的TBST缓冲液)

脱脂奶粉 5 g
TBST 100 mL

        溶解后使用,一次性使用。 


RIPA(中)裂解液

试剂 用量 终浓度
Tris-base 0.6055 g 50 mM
NaCl 0.8766 g 150 mM
EDTA·2Na.2H2O 0.037224 g 1 mM
SDS 0.1 g 0.1%
脱氧胆酸钠 0.5 g 0.5%
NP-40 1 mL 1.0%

        Tris-base、NaCl、EDTA、SDS称量后用蒸馏水溶解,浓HCl调pH值至7.4,先配置10%脱氧胆酸钠,加入5 mL即为0.5%,再加入1 mL的NP-40,混匀后定容至100 mL,分装,-20℃保存。


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Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《缓冲液配制指南》. 阿拉丁知识库,更新于 2024年10月24日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/buffer-preparation-guide.html
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