材料与安全注意事项

实验前，请准备以下材料：CdSe/ZnS量子点（产品编号C139731）、适当的有机溶剂或水性缓冲液（取决于表面配体类型）、用于验证发射光谱的紫外灯或荧光分光光度计、微量离心管（棕色或铝箔包裹）、丁腈手套、实验服及护目镜。

安全提示：CdSe/ZnS量子点含有镉（一种有毒重金属）及硒化合物。操作时须严格遵守所在机构的化学品安全规定，全程佩戴适当的个人防护装备（PPE）。所有废弃物（包括用过的吸头、离心管及溶剂废液）须作为危险重金属废物，依据当地法规进行处置。使用前请查阅产品C139731的安全数据表（SDS）。避免吸入气溶胶或粉尘，使用有机溶剂时须在通风良好的区域或通风橱中操作。

储备液制备与稀释

步骤1 – 检查储备液：打开量子点储备液瓶前，先使其恢复至室温。轻柔涡旋或超声处理（水浴超声，30–60秒）以确保均匀分散。请勿使用探针超声，以免损伤ZnS壳层。

步骤2 – 确定浓度：使用紫外-可见分光光度计在第一激子吸收峰处测量吸光度，利用产品质检报告（CoA）中提供的摩尔消光系数，通过比尔-朗伯定律（A = ε·c·l）计算摩尔浓度。注意：请从CoA中核实批次特定消光系数，勿假设通用值。

步骤3 – 制备工作浓度稀释液：将储备液用适当溶剂稀释（疏水性量子点用甲苯；经表面功能化的水溶性量子点用PBS或HEPES缓冲液）至所需工作浓度。成像应用的典型工作浓度为1–100 nM，但应根据具体实验进行优化。用移液枪轻柔混匀，避免剧烈涡旋稀释液。

步骤4 – 过滤（如需）：用于细胞成像时，使用前将水性量子点溶液通过0.22 µm注射式过滤器过滤以去除聚集体。

荧光成像设置与图像采集

激发光源：CdSe/ZnS量子点可在低于其发射峰的宽波长范围内被激发。选择激发光源（激光线或带通滤光片滤波光源）时，激发波长应至少比发射峰低20–30 nm，以减少光谱串扰。常用激发波长包括405 nm、445 nm或488 nm激光线（具体取决于发射颜色）。

发射滤光片选择：选择以量子点发射峰为中心的带通发射滤光片（请参阅CoA中批次特定的发射光谱）。CdSe/ZnS量子点的窄半高宽（FWHM，通常为20–40 nm）使多色成像时光谱重叠极小，适合多通道复用成像。

采集设置：从低激发功率开始以减少光漂白，然后优化曝光时间和探测器增益。量子点存在闪烁现象（荧光间歇性）；进行单粒子追踪时，应使用短曝光时间（≤100 ms）和高帧率。集合成像时，时间平均采集可减少闪烁的可见影响。

对照设置：始终设置不含量子点的阴性对照，并在适用情况下设置已知标记的阳性对照，以验证信号特异性。

储存、稳定性与故障排查

储存：将CdSe/ZnS量子点储备液于2–8°C避光保存，瓶盖拧紧以防溶剂挥发和氧化。除非产品说明书确认可冷冻保存，否则不应冷冻。避免长时间暴露于紫外线或环境光下，以防表面配体光氧化和量子产率下降。

常见问题及解决方法：

• 聚集：若出现聚集（可见浑浊或发射峰红移、展宽），应短暂水浴超声样品并重新过0.22 µm滤膜。检查溶剂兼容性和缓冲液离子强度。
• 亮度降低：可能提示光氧化、配体脱落或储备液降解。验证储存条件并检查批次有效期。与参考吸收光谱比对，激子特征峰消失说明纳米粒子已降解。
• 高背景荧光：确保所有塑料耗材和缓冲液中不含荧光污染物。使用棕色离心管，样品制备过程中尽量减少环境光照射。
• 单粒子实验中的闪烁伪影：使用短时间采集窗口，并考虑采集后应用闪烁分析算法进行数据处理。