解冻细胞
1、将冷冻细胞置于37°C水浴中约2分钟或直至细胞解冻。

2、将细胞放入MEM培养基（室温）+10%FBS中10分钟。

3、在室温下以1200 rpm的转速离心细胞5分钟。

4、将细胞重新悬浮至10⁵个细胞/毫升的最终浓度。

培养细胞

1、在每个培养瓶中放置约2.5×10⁶个细胞（25 mL 1×10⁵再悬浮细胞）。

2、关闭烧瓶盖，但不要太紧。

3、将装有细胞的烧瓶置于37°C、含5%CO2的培养箱中。

4、每天检查烧瓶中介质颜色和/或单层的变化。

更换细胞培养基

1、始终不要使用一个烧瓶，第二天喂食，以免出现污染问题。

2、培养基应每2/3天喂食一次——一旦培养基开始变色。

3、将培养瓶从培养箱中取出，放入层流罩中。

4、从烧瓶中取出50%-75%的当前介质。用室温MEM介质（10%FBS）替换所取的量。

5、将烧瓶放回培养箱中，并将信息记录在数据表上。

传代细胞

1、移除当前培养基。

2、加入10毫升0.025%-0.25%胰蛋白酶，使细胞在室温下静置10分钟。可能有必要将培养瓶敲打在软篷计数器上，以清除烧瓶表面的任何“粘性”细胞。

3、10分钟后，立即添加室温MEM培养基（10%FBS）使胰蛋白酶失活。

4、将细胞浓度调整为每毫升1 x 10⁵个细胞。

5、在每个培养瓶中添加2.5×10⁶个细胞（25 mL 1×10⁵再悬浮细胞）。

6、盖上瓶盖，但稍有松动。

7、将培养瓶放回培养箱中，每天检查培养基变化/单层形成情况。

8、将信息记录在数据表上。