材料与试剂

实验开始前，请准备以下材料：

• CHES（C110897）——阿拉丁科学，纯度≥99%
• 高纯度（18.2 MΩ·cm）去离子水
• 1 M NaOH溶液（用于pH调节）
• 1 M HCl溶液（如需pH修正）
• 经过校准的pH计（电极适用于碱性范围）
• 分析天平（读数精度±0.1 mg）
• 容量瓶（100 mL或1 L，视需要选择）
• 磁力搅拌器及搅拌子
• 0.22 µm滤膜（如需无菌过滤）

缓冲液配制操作步骤

以下操作步骤用于配制1 L浓度为100 mM、目标pH（例如pH 9.0）的CHES缓冲液：

1. 计算并称量CHES：配制100 mM溶液，需在分析天平上称取20.73 g CHES（MW = 207.29 g/mol）。
2. 溶解：将CHES粉末转移至含约800 mL去离子水的1 L烧杯中，搅拌至完全溶解。
3. 调节pH：将经校准的pH计探头插入溶液，在搅拌条件下逐滴加入1 M NaOH，将pH升至目标值（如9.0）。在距目标pH 0.2个单位时进行精细调节。
4. 转移并定容：将溶液定量转入1 L容量瓶，加去离子水定容至刻度线，充分混匀。
5. 复核pH：对最终溶液重新检测pH值，必要时再行调节。注意pH随温度变化，需记录测定温度。
6. 过滤（可选）：若用于细胞培养或灵敏检测，在无菌条件下通过0.22 µm滤膜过滤缓冲液。
7. 标记并储存：标注浓度、pH、配制日期及操作者姓名。于4 °C保存，可保存最长1个月；如出现浑浊或沉淀，应及时丢弃。

注意：CHES的pKa具有明显温度系数（约−0.009 pH单位/°C），因此务必在实际工作温度下调节pH。

故障排除与关键提示

• pH难以稳定：每次加入NaOH后需充分等待平衡（≥30秒）。确保pH电极已使用pH 7.0和10.0标准缓冲液新鲜校准。
• 出现沉淀：CHES通常溶解性极好；若出现沉淀，可能提示受到污染或使用了硬水。建议使用18.2 MΩ·cm去离子水重新配制。
• 酶活性抑制：CHES与大多数酶兼容，且不螯合二价阳离子（如Mg²⁺、Zn²⁺），适用于金属酶研究。
• 紫外干扰：CHES在260–280 nm附近紫外吸收极低，适用于核酸和蛋白质的吸光度法定量检测。
• 高压灭菌兼容性：CHES缓冲液可进行高压灭菌；但高压灭菌后应重新核验pH，因可能发生轻微偏移。

应用与储存

CHES缓冲液适用于碱性pH范围内多种研究应用：

• 凝胶电泳：作为天然PAGE及需要碱性条件的琼脂糖凝胶的电泳运行缓冲液。
• 酶动力学：用于碱性磷酸酶、蛋白酶及其他在pH 8.5以上具有活性的酶的反应缓冲液。
• 蛋白质晶体学：用于稀疏矩阵结晶筛选试剂盒中的碱性pH条件筛选缓冲液。
• Western印迹：碱性转移方案中的转膜缓冲液组分。
• 毛细管电泳：pH 9.0–10.0条件下的背景电解质。

储存：干燥CHES粉末应在室温（15–30 °C）下储存，避免受潮和光照。配制好的缓冲液溶液应在4 °C储存，并在一个月内使用完毕。如需长期储存，可分装后于−20 °C冷冻保存。