巧克力平板培养基主要用于奈瑟氏菌属和嗜血杆菌等需氧菌的分离和培养。巧克力平板应用羊血或免血制备。因其中含有Ⅹ和Ⅴ因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好，凡疑有这些菌种存在的标本，均须接种巧克力平板。血液标本培养，增苗后有细苗生长，若移种巧克力平板上，有利于分离到更多的细菌。本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

巧克力平板制备

原理

主要是蛋白胨和牛肉粉用来提供细菌生长所需的碳源、氮源、氨基酸以及维生素。氯化钠维持培养基中的渗透压，琼脂用做凝固剂。脱纤维羊血提供氯化血红素和辅酶I，为嗜血杆菌属的生长提供特殊营养。巧克力平板培养基还能够培养其他细菌，主要的原因是血液中有V、X因子，这两种因子是位于红细胞中的，一般细菌不能利用，轻微的加热（一般为75~85摄氏度左右）使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。

材料与仪器

脱纤维羊血或兔血
蛋白胨 牛肉粉 氯化钠 琼脂 蒸馏水
玻璃平皿 量筒 高压蒸气锅 pH计 85℃水浴锅 超净工作台 称量天平

步骤

一、巧克力平板主要成分

1. 以羊血制备

蛋白胨             10g

牛肉粉               3g

氯化钠               5g

脱纤维羊血    50mL

琼脂                 15g

蒸馏水       1000mL

2.以兔血制备

鲜牛肉浸出液       1000mL

蛋白胨                 10g

氯化钠                 5g

脱纤维兔血          100mL

琼脂                    15g

二、巧克力平板制备

1. 将除脱纤维羊血（兔血）外的主要成分混合，校正pH在7.2——7.4，高压灭菌后，冷却至85℃。

2. 无菌方法加入脱纤维羊血（兔血），摇匀后置于85℃水浴中，维持该温度10分钟，使之成巧克力色。

3. 取出，置于室温冷却至约50℃，倾制平板。

注意事项

1. 外观：巧克力平板培养基应为巧克力色固体，表面平整，不得有裂痕。且培养基不得有肉眼可见气泡及肉眼可见物（但允许有少量肉眼可见纤维）。

2. pH值应在7.2±0.2。

3. 无菌要求：将巧克力平板培养基置于37℃±2℃培养箱中培养7天，不得有菌生长。

常见问题

本实验来源于牡丹江医学院 检验专业实验指导

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