使学员掌握碱性磷酸测定的原理，方法及试剂的配制，本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

比色法检测血清碱性磷酸酶（ALI）实验

原理

在PH10的反应液中，碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，生成游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比邻结合，并经铁氯化钾氧化生成显红色的醌的衍生物，根据红色深浅计算酶活力的高低。

步骤

一、 实验试剂：

l. 0.1mol/L碳酸盐缓冲液（PH10.0）

溶解无水碳酸钠6.39g碳酸氢钠3.36，4-氨基安替比林结合1.5g于800ml蒸馏水中，将此溶液入1000ml容量瓶内，加蒸馏水至刻度，置棕色瓶中保存。

2. 20mmol/L 磷酸苯二钠溶液：先将500ml蒸馏水煮沸，消灭微生物，逐渐加入磷酸苯二钠2.18g（如含2分子结晶水则应称取2.54g）冷却后加氯仿2ml防腐，置冰箱保存，称底物溶液．

3. 铁氰化钾溶液：分别称铁氰化钾2.5g，硼酸17g各自溶于400 ml蒸馏水中待两液混合后，加蒸馏水至1000ml，置棕色瓶中避光保存，如出现蓝绿色即弃去。

4. 酚标准贮存液（1mg/ml）简易购买商品标准液

5. 酚标准应用液0.05mg/ml：酚标准贮存液5m1，加蒸馏水至100ml，此夜只能保存2-3天。

二、 实验操作：取16mm×100mm试管按表进行编号与测定

血清碱性磷酸酶测定步骤：

立即混匀，在波长51Onm，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度．测定管吸光度，减去对照管吸光度，查标准曲线表，求出酶的活力单位。

金氏单位定义：100ml，血清在37℃，与底物作用5分钟，产生1mg酚为一个金氏单位

标准曲线绘制：

参考值：成年人：3 - 13 金氏单位

儿童：  5 - 28 金氏单位

注意事项

1. 铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳定显色作用。

2. 底物中不应含有游离酚，如空白管显红色，说明磷酸苯二钠开始分解应弃去不用。

3. 加人铁氰化钾后必须迅速混匀，否则显色不充分。

4. 黄疸血清及浴血血清分别作对照者，一般血清标准本可以共用对照管。

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