Q1：蛋白Marker在凝胶上缺失部分条带，可能是什么原因？

这通常与所选凝胶的浓度（百分比）及其有效分离范围有关。蛋白Marker的条带会根据其分子量在不同孔径的凝胶中进行分离。在Tris-Glycine体系中，8%-10%的凝胶适合分离大分子量蛋白，但可能导致小分子量蛋白（如10,15 kDa）迁移过快，甚至跑出凝胶。

12.5%-15%的凝胶适合分离小分子量蛋白，但可能导致大分子量蛋白（如180 kDa）迁移过慢，压缩在分离胶顶部。

Q2：在蛋白Marker泳道中出现了额外的条带，如何解决？

额外条带通常源于操作或保存问题：

v交叉污染：上样时确保样品之间没有相互渗漏，尤其是在高灵敏度的银染实验中。

v蛋白质降解：若长期反复冻融或保存不当，多数预染/未染Marker均可能发生降解，建议使用干净的枪头取样；产品启封后，立即进行分装保存，以避免多人使用时引入污染。

Q3：推荐的蛋白Marker上样体积是多少？

v对于0.75mm和1.0mm厚的凝胶，建议上样3-5 μL。

v对于1.5mm厚的凝胶，建议上样8-10 μL。

Q4：为什么预染蛋白Marker的条带宽度不一致（上宽下窄）？

预染条带上下不等宽多由上样盐分/体积过大、胶浓不匹配或过热引起；pH失准亦可加剧。请使用新鲜、pH准确的缓冲，控制上样盐度与体积，并避免过热。

Q5：为什么Marker启用后条带逐渐消失，最后只剩下前沿的蓝色条带？

条带衰减常见于反复冻融、长时间室温放置、过度稀释或对不宜加热的预染Marker进行煮沸处理；亦可能因污染。请按说明书分装于−20/−80 ℃保存，避免煮沸不宜加热的预染Marker，并使用建议的稀释与还原条件。

Q6：蛋白Marker条带弥散、模糊怎么办？

v试剂与凝胶：使用超纯水配制试剂；确保凝胶浓度合适且在有效期内；注意丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺（特别是开封后）可能失效。

v电泳条件：避免电压过高或电泳时间过长导致过热；建议参照说明书并在必要时预冷缓冲液。

v缓冲液：使用新鲜配制、pH准确的电泳缓冲液。

v样品保存：正确保存Marker，避免污染和反复冻融。

Q7：为什么条带不整齐，出现“微笑状”或“皱眉状”弯曲？

（1）“微笑状”条带（向上弯曲）：通常由凝胶中部温度过高导致。可采取降温措施，如：在4°C环境电泳、增加外槽缓冲液体积、降低电泳功率。

（2）“皱眉状”条带（向下弯曲）：通常由不均匀的电场或凝胶厚度不均导致。检查并确保：

v凝胶底部无气泡。

v凝胶已完全聚合。

v玻璃板清洁无残留。

（3）其他原因：

v边缘效应：建议将Marker点在中部泳道，或在两侧边缘各点一个Marker泳道。

v凝胶配制不均、存有气泡。

v分离胶与浓缩胶界面不平。

v电泳槽密封不严导致电压不稳。

v丙烯酰胺等试剂失效。

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