原理与背景

肌酐是肌酸和磷酸肌酸发生自发性非酶促环化的产物，在肌肉中以与肌肉质量成正比的相对恒定速率生成。由于肌酐可被肾小球自由滤过，且几乎不被肾小管重吸收或分泌，血浆肌酐浓度及尿肌酐排泄量是临床诊断与科研模型中评估肾小球滤过率（GFR）的标准指标。

肌酐定量分析主要采用以下两种策略：

• Jaffe（碱性苦味酸）法：肌酐在碱性条件下与苦味酸反应，生成橙红色Janovsky复合物，在510–520 nm处进行分光光度法检测。该方法简便、经济，但易受蛋白质、葡萄糖、酮体及某些药物干扰。
• 酶法：肌酐依次经肌酐酶、肌酸酶和肌氨酸氧化酶（或其他酶级联）水解，产生过氧化氢，再通过Trinder型过氧化物酶反应进行检测。与Jaffe法相比，该法特异性更高，基质干扰更少。

材料与试剂

开始检测前，确保所有试剂均符合相应分析级别要求。

通用材料

• 肌酐标准品（如Aladdin C108393）
• 蒸馏水或去离子水（18 MΩ·cm）
• 可在510–520 nm读数的酶标仪或分光光度计
• 96孔平底透明微孔板或比色皿
• 移液器及经校准的微量移液器（2–1000 µL量程）
• 离心机（≥3000 × g）
• 样本采集管（血清分离管或EDTA管用于血浆；尿液使用无菌容器）

Jaffe法试剂

• 苦味酸溶液（1.2% w/v水溶液，注意：干燥状态下易爆）
• 氢氧化钠溶液（0.75 M）
• 肌酐校准标准品（0、0.5、1、2、4、8 mg/dL，由C108393配制）

酶法试剂

• 肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶混合物（商业试剂盒或单独购买）
• 辣根过氧化物酶（HRP）及显色剂（如4-氨基安替比林/TOOS或类似Trinder试剂）
• 磷酸盐或HEPES检测缓冲液（pH 7.4–7.8）

储存：将肌酐标准品C108393密封保存于室温干燥处，防潮。

逐步操作流程

样本制备

1. 按标准静脉采血程序采集血液；血清样本在室温静置30分钟凝固后，以2000–3000 × g离心10分钟，取上清液（血清）。血浆样本采集于EDTA管后立即离心。
2. 尿液可采集定时（如24小时）或随机样本。检测前将尿液用去离子水稀释1:50至1:100，使读值落在标准曲线线性范围内。
3. 样本可在4 °C保存最多48小时，或于−20 °C长期保存。避免反复冻融。

Jaffe比色法

1. 使用前将等体积1.2%苦味酸溶液与0.75 M NaOH混合，现配现用碱性苦味酸工作试剂。
2. 将20 µL各标准品及样本分别加入相应孔或比色皿中。
3. 每孔加入180 µL碱性苦味酸工作试剂，轻轻混匀。
4. 在室温（20–25 °C）避光精确孵育30分钟。
5. 以试剂空白（去离子水代替样本）为参比，在510–520 nm处读取吸光度。
6. 以标准品浓度对吸光度绘制标准曲线，通过内插法计算样本浓度。

酶法

1. 按试剂盒说明复溶或配制酶试剂，预热至37 °C。
2. 向每孔加入10 µL样本或标准品及190 µL酶试剂（具体用量按试剂盒要求调整）。
3. 于37 °C孵育5–10分钟。
4. 在显色剂指定波长（通常为545或600 nm）处读取终点吸光度。
5. 根据标准曲线计算肌酐浓度。

质量控制

• 每批次检测至少包含一份低浓度和一份高浓度质控品。
• 质控品可接受回收率：靶值的85–115%。
• 批内精密度变异系数（CV）应≤5%。

故障排除与干扰因素注意事项

进行肌酐检测时，常见以下问题：

Jaffe法主要干扰因素：胆红素、溶血、脂血及多种药物可引起正向或负向偏差。当样本完整性受损或需要高特异性时，优先选择酶法。

数据分析与结果报告

获得吸光度读值后，按以下步骤进行处理：

1. 扣除空白：从所有标准品和样本读值中减去试剂空白的平均吸光度。
2. 建立标准曲线：以空白校正后的吸光度（y轴）对肌酐浓度（mg/dL或µmol/L，x轴）作图，在工作范围内预期线性回归R²≥0.998。
3. 计算样本浓度：从标准曲线内插求值。稀释尿液样本需乘以相应稀释倍数。
4. 单位换算：1 mg/dL肌酐 = 88.4 µmol/L。
5. 24小时尿肌酐排泄量：mg/天 = 尿肌酐（mg/dL）× 总尿量（dL）。可用于标准化其他分析物排泄量（如白蛋白/肌酐比值）。
6. GFR估算：在适当的研究背景下，可将血浆肌酐值代入经验证的公式（如CKD-EPI或MDRD）估算GFR（eGFR）。

注意：报告结果时务必注明所用方法（Jaffe法或酶法），因为参考区间及实验室间比对均依赖于检测方法。