实验方案（Protocols）

CZC24832 PI3Kδ 抑制剂操作规程：制备与检测应用

· · 发布于 2026年10月4日 · 更新于 2026年10月4日 ·

CZC24832是一种强效、选择性的PI3Kδ（磷脂酰肌醇3-激酶δ）小分子抑制剂，用于生化激酶测定和细胞研究，以探究PI3Kδ介导的信号通路。

产品名称: CZC24832
货号: C128050
作用靶点: PI3Kδ（磷脂酰肌醇3-激酶δ）
化合物类别: 选择性PI3Kδ小分子抑制剂
推荐溶剂: DMSO（二甲基亚砜）
储存条件: 于-20°C避光防潮保存
应用: 激酶抑制测定、细胞信号转导研究

所需材料

在开始本方案之前，请确保以下材料已准备齐全：

CZC24832（货号：C128050，Aladdin Scientific）
无水DMSO（纯度≥99.9%，分子生物学级）
适当的水性测定缓冲液（例如含HEPES或Tris-HCl的激酶测定缓冲液，pH 7.4）
微量离心管（1.5 mL或2 mL，建议使用低吸附型）
经校准的分析天平或移液器
涡旋混合器及短暂离心机
细胞培养试剂（如进行细胞测定）：表达PI3Kδ的相关细胞系、无血清培养基、刺激剂（如细胞因子或生长因子）
个人防护装备（实验服、丁腈手套、护目镜）

注意：使用前，所有浓度及具体IC₅₀值应参照货号C128050随附的最新检验合格证（CoA）进行确认。

母液配制

按照以下步骤配制CZC24832的DMSO母液：

恢复室温：打开小瓶前，将CZC24832（货号：C128050）在室温下平衡约15–20分钟，以防止化合物表面出现水分凝结。
计算所需体积：根据所需母液浓度（通常为10 mM）计算DMSO用量。使用CoA上提供的分子量，精确计算质量与体积的比例。
溶解化合物：将计算好的无水DMSO直接加入小瓶中，旋紧瓶盖后涡旋混合30–60秒至完全溶解。如有必要，可在水浴中短暂超声（室温，≤2分钟）。
短暂离心：以2,000–3,000 × g离心1分钟，将瓶盖和瓶壁上的液体收集至管底。
分装并储存：将母液分装至低吸附微量离心管中，以单次用量保存。于-20°C避光储存，避免反复冻融，冻融次数不超过三次。

重要提示：使用前目视确认溶液完全澄清。若观察到沉淀，可轻微加温后重新涡旋。若溶液仍浑浊，则不可使用。

激酶抑制测定方案

本节介绍评估CZC24832对PI3Kδ活性的通用生化激酶抑制测定方法。请根据您所使用的具体测定试剂盒或平台，调整测定缓冲液成分、酶浓度和底物浓度。

配制工作浓度稀释液：将CZC24832母液用测定缓冲液稀释至所需工作浓度。确保测定体系中DMSO终浓度不超过0.1–1%（v/v），以避免溶剂对酶活性的影响。设置溶剂（DMSO）对照孔。
抑制剂与酶预孵育：将CZC24832工作液与PI3Kδ酶在测定缓冲液中混合，按测定试剂盒说明在室温或37°C下孵育15–30分钟，以达到抑制剂结合平衡。
启动激酶反应：加入适当底物（如磷脂酰肌醇或含ATP的底物混合液）以启动反应，在37°C下孵育推荐时间。
终止反应并检测：根据您的检测平台（如HTRF、发光法、基于ELISA的ADP检测）终止反应，并按仪器制造商说明测定信号。
数据分析：相对于溶剂对照计算抑制百分比。以抑制率对log[CZC24832]作图，使用非线性回归（如四参数逻辑斯谛曲线拟合）确定IC₅₀值。

必需对照：阳性对照（已知PI3Kδ抑制剂或最大抑制）、阴性对照（仅溶剂）及无酶空白对照。

细胞测定指南

CZC24832可用于细胞测定，以研究相关细胞模型（如免疫细胞系或原代白细胞）中PI3Kδ依赖性信号传导（如Akt磷酸化、下游PIP3产生）。

细胞铺板：以适当密度将细胞铺于相应培养基中。贴壁细胞过夜贴附或平衡，悬浮细胞静置1–2小时。
血清饥饿（如适用）：对于信号测定，在处理前将细胞于无血清培养基中饥饿2–4小时，以降低基础PI3K活性。
化合物处理：将CZC24832以所需浓度加入（从DMSO母液稀释至培养基中，终浓度DMSO ≤ 0.1% v/v）。在刺激前，于37°C、5% CO₂条件下孵育细胞30–60分钟。
刺激：用适当的激动剂（如细胞因子、生长因子或抗原受体交联剂）刺激细胞所需时间。
样品收集与裂解：弃去培养基，用冰冷PBS洗涤细胞，再用含磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的适当裂解缓冲液裂解细胞。
结果读取：根据实验设计，通过Western blot（抗pAkt Ser473或Thr308抗体）、ELISA或流式细胞术定量PI3Kδ通路活性。

注意：细胞测定中CZC24832的最适浓度应通过剂量-反应实验经验性确定，因为细胞通透性和蛋白质结合可能导致有效浓度相对于生化IC₅₀值发生偏移。

故障排除与安全注意事项

常见问题排除：

溶解性差：若CZC24832在DMSO中未能完全溶解，可将小瓶短暂加热至37°C后重新涡旋。在确认完全溶于DMSO之前，请勿加入水性缓冲液。
在水性缓冲液中沉淀：若稀释至水性介质后出现沉淀，可降低化合物终浓度，或在测定允许范围内谨慎提高DMSO含量，预热缓冲液也可能有助于改善溶解性。
抑制率低或不一致：验证母液完整性（检查是否有沉淀或变色），确认化合物浓度，并确保所有孔中DMSO溶剂浓度一致。检查酶和底物浓度是否在测定的线性范围内。
细胞测定本底偏高：确保磷酸酶抑制剂新鲜配制，并在使用前立即加入裂解缓冲液。在冰上处理样品，以减少去磷酸化。

安全信息：

CZC24832仅供科学研究使用，未获批准用于人类或兽医治疗用途。请将其作为潜在有害化学品处理：始终佩戴适当的个人防护装备（丁腈手套、实验服和护目镜）。含DMSO的废液应按照所在机构的化学废物处置法规进行处理。有关完整危害信息，请参阅Aladdin Scientific提供的CZC24832（货号：C128050）安全数据表（SDS）。

常见问题

CZC24832推荐使用哪种溶剂溶解？

CZC24832应溶于无水DMSO（纯度≥99.9%）以配制母液，通常浓度为10 mM。稀释至水性测定缓冲液或细胞培养基时，确保终浓度DMSO不超过0.1–1%（v/v），以避免溶剂对细胞或酶活性产生不良影响。

CZC24832应如何储存以保持稳定性？

CZC24832（货号：C128050）应于-20°C干燥、避光环境中密封储存，以隔绝水分。将母液分装以减少冻融次数，冻融次数不应超过三次。打开小瓶前，始终使其恢复室温以防止水分凝结。请参阅产品CoA获取批次特异性稳定性数据。

在CZC24832激酶抑制测定中应包含哪些对照？

设计良好的测定应包括：（1）溶剂对照（等量DMSO，不含化合物），以建立0%抑制基线；（2）阳性抑制对照，使用经验证的PI3Kδ抑制剂在饱和浓度下建立100%抑制参考；（3）无酶空白对照，用于测量背景信号。这些对照可实现抑制百分比的准确计算及IC₅₀的可靠测定。

CZC24832能否用于原代免疫细胞？

CZC24832已在表达PI3Kδ的免疫细胞背景中进行研究，因为PI3Kδ主要在造血细胞中表达。然而，对于每种特定原代细胞类型和实验模型，最适工作浓度、处理时间和检测策略必须通过实验经验性验证。建议查阅最新文献，并通过预实验确认具体实验条件。

CZC24832在PI3K亚型间的选择性特征如何？

据报道，CZC24832相对于其他I类PI3K亚型（PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ）具有对PI3Kδ的选择性抑制活性。研究人员应查阅原始文献及产品CoA以获取具体选择性比值数据，因为精确的选择性倍数值需对照引用原始资料进行核实。

参考文献

Vanhaesebroeck B, Guillermet-Guibert J, Graupera M, Bilanges B. The emerging mechanisms of isoform-specific PI3K signalling. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2010;11(5):329–341. doi:10.1038/nrm2882
Sadhu C, Masinovsky B, Dick K, Sowell CG, Staunton DE. Essential role of phosphoinositide 3-kinase delta in neutrophil directional movement. Journal of Immunology. 2003;170(5):2647–2654. doi:10.4049/jimmunol.170.5.2647
Aladdin Scientific. CZC24832 (SKU: C128050) Certificate of Analysis and Product Data Sheet. Aladdin Scientific; [current lot].

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

目录：实验方案（Protocols）

探索主题：实验方案 PI3K抑制剂激酶测定 CZC24832 PI3Kδ

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。