通过此实验使学生掌握邻甲苯胺法测血糖的原理，试剂的配制学会邻甲苯胺法测定血糖的方法。本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

邻甲苯胺测定血清中葡萄糖实验

原理

葡萄糖与邻甲苯胺在强酸溶液中加热，葡萄糖的醛基与邻甲苯胺缩合成葡萄糖基胺后者脱水生成席夫（Schiff）碱，再径结构重排生成有机化合物，吸水峰630nm。

步骤

一、实验试剂：

l. 邻甲苯胺试剂：940ml冰醋酸中加入硫脲1.5g邻甲苯胺60ml混合．直至硫脲完全溶解，置棕色瓶中．

2. 12mmol/L苯甲酸溶液：于900ml蒸馏水中加入苯甲酸（MW＝122.12）1.46g，加热助溶，冷却后置于1L容量瓶中，加蒸馏水至刻度．

3、葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）：称取无水葡萄糖（MW＝180.16）预先置80℃烤箱干燥至恒定，移置干燥器内保存）1.802g，溶解于80ml苯甲酸溶液中移置 100ml容量瓶中，再加苯甲酸溶液至刻度．

4、葡萄糖标准应用液（5mmol/L）：葡萄糖标准贮存液50ml，置于100ml容量瓶中加苯甲酸溶液至刻度．

二、实验操作；

取数支 16mm×150mm试管，按下表进行操作：

混匀后，置沸水浴中加热12min，取出置冷水中冷却5min；分光光度计630nm，比色杯光径1.0cm空白管调零，读取标准管与测定管吸光度。

五、计算：

体液葡萄糖 mmol／L＝测定管吸光度/标准管吸光度×5

参考值：血清葡萄糖为 3.89－6.11mmol／L［70－110mg/dL］

注意事项

1、本法不需除蛋白，邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，血液中其它还原物质基本无影响。

2、葡萄糖与邻甲苯胺试剂显色的深浅及稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度冰醋酸及加热时间有关．因此，测定管、标准管、空白管的加热时间及温度必须一致，每批测定数不宜过多，水浴中水量要大，水面应超过试管中试剂液面以便能较好的控制反应条件。

3、最终反应液偶尔会产生混浊，最常见的原因是高脂血症；此时可向3ml显色液中加入异丙醇，充分混匀溶解脂质，可清除浊度，所测得吸光度乘以1.5．

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