实验方案（Protocols）

DiAzKs盐酸盐：性质、制备与应用实验方案

· · 发布于 2026年10月25日 · 更新于 2026年10月25日 ·

DiAzKs hydrochloride是一种含重氮官能团的赖氨酸类似物，专为通过琥珀密码子抑制实现蛋白质位点特异性导入而设计，可在遗传密码扩展工作流程中实现共价交联和生物正交标记。

产品名称: DiAzKs盐酸盐
货号: D656555
化合物类别: 含重氮官能团的非天然氨基酸（赖氨酸类似物）
主要应用: 遗传密码扩展；通过琥珀密码子抑制实现蛋白质位点特异性标记
推荐储存条件: 于−20°C避光防潮保存
溶剂相容性: 可溶于水或DMSO（建议通过吸光度或质量验证浓度）

概述与作用机制

DiAzKs盐酸盐是一种合成的含重氮基团赖氨酸类似物，专为遗传密码扩展（GCE）系统开发。该化合物在赖氨酸侧链上引入了活性重氮基团（–C(=N₂)–），可在温和条件下与羧酸配对物发生高选择性生物正交反应，使其在共价蛋白质-蛋白质及蛋白质-核酸交联研究中具有重要价值。

在GCE工作流程中，DiAzKs可被工程化的吡咯赖氨酰-tRNA合成酶（PylRS）/tRNA^Pyl对识别并充电，从而通过位点定向突变引入的琥珀密码子（UAG）实现共翻译插入。导入后，重氮基团可参与卡宾介导的插入反应或与邻近亲核试剂反应，实现对相互作用生物分子的近端依赖性共价捕获。

盐酸盐形式与游离碱相比具有更好的水溶性，便于直接添加至细胞培养基或体外翻译反应体系中。

储备液制备

请按照以下步骤制备DiAzKs盐酸盐工作储备液：

确定目标浓度：储备液浓度通常为100–500 mM，添加至培养基后终浓度为0.1–2 mM。请根据实验设计进行调整。
选择溶剂：DiAzKs盐酸盐据报道可溶于水和DMSO。制备水溶液储备液时，建议使用无菌磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）或超纯水。如使用DMSO，需确保培养基中DMSO终浓度不超过0.1%（v/v），以避免细胞毒性。
溶解化合物：在琥珀色灯光下或弱光环境中，将所需量的DiAzKs盐酸盐称入洁净干燥的微量离心管。加入计算量的溶剂，轻柔涡旋30–60秒；若未完全溶解，可短暂超声处理（30秒，室温）。
过滤除菌：添加至细胞培养体系前，用0.22 µm注射器滤膜对储备液进行过滤除菌。
验证浓度：通过紫外-可见吸光度（如化合物具有明确消光系数）或实验室适用的分析方法确认储备液浓度。
分装储存：分装为单次用量以避免反复冻融。于−20°C避光保存。重氮基团对热、强光及酸性条件敏感，应尽量减少不必要的暴露。

注意：当前来源资料未确认具体溶解度数值和消光系数，请参阅产品随附的质量检测报告（CoA）或联系阿拉丁科学技术支持团队。

实验应用方案

以下为在哺乳动物细胞中通过琥珀密码子抑制将DiAzKs盐酸盐导入目的蛋白的通用方案。如需用于细菌或无细胞体系，请相应调整。

所需材料

DiAzKs盐酸盐储备液（按上述方法制备）
含目的基因（在目标位点引入UAG琥珀密码子）的表达质粒
编码已进化可识别DiAzKs的正交PylRS变体及其同源tRNA^Pyl的质粒
所选哺乳动物细胞系（如HEK293T）
完全培养基（如DMEM + 10% FBS）
转染试剂

操作步骤

细胞接种：转染前18–24小时，以适当密度接种细胞（如6孔板每孔2 × 10⁵个细胞）。
转染：按转染试剂厂商推荐方案，将含琥珀密码子的表达质粒与正交PylRS/tRNA^Pyl质粒共转染。
化合物添加：转染时（或转染后立即），将DiAzKs盐酸盐补充至培养基，终浓度为0.25–1 mM（需经验性优化）。每24小时更换一次含DiAzKs的新鲜培养基。
表达周期：在37°C、5% CO₂条件下表达蛋白24–48小时。
交联或标记：如需进行光诱导或化学诱导交联，请遵循重氮活性所需的特定条件（如紫外照射、加入反应配对物），并在针对您的生物体系已验证的条件下进行。
收获与分析：在适当条件下裂解细胞。通过SDS-PAGE、蛋白质印迹或质谱法分析蛋白表达及非天然氨基酸导入情况。不添加DiAzKs时的全长蛋白产物作为阴性对照。

优化说明：每种目的蛋白的最佳DiAzKs浓度、表达时间和PylRS变体均需经验性确定。如需指导，请参阅已发表的DiAzKs或密切相关重氮赖氨酸类似物文献。

储存、稳定性与安全注意事项

储存：将DiAzKs盐酸盐于−20°C密封避光防潮保存。在上述条件下，化合物预计在产品质量检测报告（CoA）注明的期限内保持稳定。

稳定性：重氮官能团本身具有较高活性。操作DiAzKs盐酸盐时应避免接触强酸、强碱、高温或长时间紫外/可见光照射，上述条件均可导致重氮基团分解，降低化合物效能。建议尽可能现配现用，并通过小量分装避免反复冻融。

安全：与所有科研化学品一样，操作DiAzKs盐酸盐时须遵循良好实验室规范，佩戴适当个人防护装备（PPE），包括实验服、丁腈手套和护目镜。使用前请查阅本产品安全数据表（SDS）。重氮化合物具有一定活性，操作时应远离明火。废弃物处置应符合所在机构及当地法规要求。

注意：每批产品应随附产品专用SDS和CoA。如未收到上述文件，请联系阿拉丁科学客户服务团队。

常见问题排查

全长蛋白表达量低或无表达：确认所用PylRS变体已被进化或文献报道可识别DiAzKs。通过测序验证质粒完整性。逐步提高DiAzKs浓度（最高至2 mM），并确保化合物完全溶解。
化合物不溶解：轻柔加温至37°C（勿煮沸）并涡旋。若水溶性不足，可先制备DMSO母液，再稀释至水性缓冲液中。细胞实验中DMSO终浓度需低于0.1%（v/v）。
交联效率低：重氮活性可能因化合物降解而丧失。使用新鲜分装品并核查储存条件。针对光交联应用，优化照射时间和强度。
高背景或非特异性交联：设置不含目的基因琥珀密码子的阴性对照。优化DiAzKs浓度和反应时间以减少非特异性事件。
高浓度时出现细胞毒性：降低DiAzKs浓度并缩短添加时间窗口。如使用DMSO储备液，评估DMSO的影响。

常见问题

DiAzKs盐酸盐有什么用途？

DiAzKs盐酸盐是一种含重氮官能团的赖氨酸类似物，主要用于遗传密码扩展实验。通过使用工程化PylRS/tRNA对进行琥珀密码子抑制，可将其位点特异性地导入蛋白质，从而实现蛋白质相互作用配体的生物正交共价交联和近端标记。

应使用什么溶剂溶解DiAzKs盐酸盐？

DiAzKs盐酸盐可溶于水（如无菌PBS或超纯水）或DMSO。对于细胞培养直接添加，优先选用水性溶剂。若以DMSO为初始溶剂，应充分稀释储备液，使细胞实验中DMSO终浓度低于0.1%（v/v）。请务必参阅产品CoA以获取确认的溶解度数据。

如何储存DiAzKs盐酸盐以保持其稳定性？

将DiAzKs盐酸盐于−20°C密封避光防潮保存。将储备液分装为单次用量，避免反复冻融。重氮基团在酸性条件、高温及紫外/可见光下易分解，因此尽量减少上述条件的暴露对于维持化合物完整性至关重要。

应使用哪种PylRS变体将DiAzKs导入目的蛋白？

应使用已进化或文献报道可特异性识别DiAzKs并将其装载至同源tRNA的吡咯赖氨酰-tRNA合成酶（PylRS）变体。请查阅描述DiAzKs或密切相关重氮赖氨酸类似物的原始文献，以确定适合您表达体系的PylRS变体。也可联系阿拉丁科学技术支持团队获取应用指导。

在标准实验室条件下操作DiAzKs盐酸盐是否安全？

操作DiAzKs盐酸盐时应遵循标准实验室安全规程，佩戴适当PPE，包括实验服、丁腈手套和安全护目镜。重氮化合物具有一定活性，应避免接触明火、强酸和过高温度。使用前务必查阅产品专用SDS，并按照机构规定处置废弃物。

参考文献

Aladdin Scientific product page: DiAzKs hydrochloride, SKU D656555. Aladdin Scientific.
MedChemExpress (MCE) product reference: HY-D0853A, DiAzKs hydrochloride. MedChemExpress.
Chin JW. Expanding and reprogramming the genetic code. Nature. 2017;550(7674):53-60. doi:10.1038/nature24031
Meineke B, Heimgaertner J, Aloisi C, et al. Genetic encoding of diazo groups for proximity-induced diazo transfer reactions in living cells. [Publication details require verification]

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

目录：实验方案（Protocols）

探索主题：非天然氨基酸细胞生物学试剂蛋白质标记遗传密码扩展重氮化合物

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。