埃拉米普雷肽三乙酸酯:操作与研究使用指南
埃拉米普雷肽三乙酸酯:操作与研究使用指南
Elamipretide三乙酸盐是一种水溶性、细胞膜可穿透的芳香族阳离子四肽(又称SS-31或MTP-131),可选择性富集于线粒体内膜,与心磷脂结合,从而维持线粒体结构及生物能量功能。
- 化学名称
- Elamipretide三乙酸盐(SS-31三乙酸盐;MTP-131三乙酸盐)
- 货号
- E1439311
- 肽序列
- D-Arg-Dmt-Lys-Phe-NH₂(游离碱核心结构)
- 溶解性
- 可溶于水及水性缓冲液;建议用无菌水或PBS配制储备液
- 主要靶点
- 线粒体内膜中的心磷脂
- 推荐储存条件
- 于−20°C干燥避光保存;避免反复冻融
- 研究应用
- 线粒体功能障碍、氧化应激、缺血再灌注损伤、心力衰竭模型研究
作用机制
Elamipretide三乙酸盐是一种芳香族阳离子四肽,可以不依赖膜电位的方式穿透细胞膜,从而无论线粒体膜电位状态如何,均能到达线粒体内膜。到达靶位后,该肽选择性地与心磷脂结合——心磷脂是线粒体内膜所特有的磷脂,对维持电子传递链(ETC)超复合体的组织结构及嵴形态至关重要。
通过稳定心磷脂,Elamipretide可促进细胞色素c与内膜的结合,维持ETC超复合体的完整性,减少电子泄漏,从而降低活性氧(ROS)的产生。其最终效果是提高ATP合成效率并减轻线粒体驱动的氧化应激——这两方面在缺血再灌注损伤、心力衰竭、神经退行性疾病及与衰老相关的线粒体功能减退模型中具有重要研究价值。
制备与操作规范
复溶:Elamipretide三乙酸盐可自由溶于水及生理缓冲液。对于大多数体外实验,建议将冻干粉溶于无菌、无核酸酶的水或磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4),配制浓缩储备液(如1–10 mM)。若用于细胞培养,需经0.22 µm滤膜过滤除菌。
分装:为减少反复冻融导致的降解,储备液配制完成后应立即分装为单次用量。分装液于−20°C保存,并在经验证的有效期内使用。
工作浓度:文献报道的典型体外工作浓度为纳摩尔至低微摩尔水平;但研究人员应针对具体细胞或组织模型进行经验性优化。体内研究的给药参数应参照已发表的实验方案及机构动物使用规范确定。
相容性:避免长时间暴露于光照、强氧化剂或极端pH条件下,以免影响肽的完整性。除非已确认溶解性,否则不应与含高浓度有机溶剂的溶液混合。
储存与稳定性
长期储存:Elamipretide三乙酸盐冻干品(干粉)应于−20°C干燥避光保存。在此条件下,预计固体化合物自生产之日起至少稳定2年,但研究人员应参照机构质控记录或产品(货号E1439311)随附的分析证书(CoA)确认稳定性。
复溶后溶液的稳定性:溶解后,水溶液更易降解。复溶后的溶液应尽快使用;短期储存(最长1个月)时,分装液可置于−20°C保存。应避免多次冻融。复溶溶液的长期稳定性尚未经过充分表征,应将此列为待进一步验证的审查事项。
运输:该化合物通常以干冰或冰袋冷链运输。收货后,请检查包装完整性,记录批号及CoA数据,并立即转移至适当储存条件下保存。
研究应用与实验注意事项
体外模型:Elamipretide三乙酸盐广泛用于细胞实验,以研究线粒体生物能量学、ROS产生、线粒体膜电位及凋亡信号通路。常用检测指标包括:通过呼吸仪(如Seahorse XF)测定耗氧率(OCR)、使用JC-1或TMRE荧光探针检测膜电位,以及用MitoSOX染色检测线粒体超氧化物。
体内模型:该化合物已在心脏缺血再灌注损伤、射血分数保留型心力衰竭(HFpEF)、骨骼肌老化及肾脏缺血等啮齿动物模型中进行研究。临床前研究中的给药途径通常为皮下注射或静脉输注。研究人员在设计体内实验时,应参阅相关原始文献及机构IACUC规范。
对照与比较:实验应设置适当的阴性对照(溶媒对照),并在适用情况下设置阳性对照(如使用线粒体解偶联剂FCCP或抗氧化剂)。若有条件,可使用乱序肽或无活性类似物作为结构对照。
盐型说明:本品以三乙酸盐形式供应(货号E1439311)。在跨研究比较不同盐型(游离碱、盐酸盐或三乙酸盐)的剂量或浓度时,研究人员必须考虑分子量差异,以确保摩尔当量一致。
质量、纯度及法规说明
纯度:Elamipretide三乙酸盐(货号E1439311)以研究级试剂形式供应。研究人员应查阅每批次随附的分析证书(CoA),以获取经确认的纯度数据(通常通过HPLC评估)及质谱鉴定结果。CoA批号应记录于实验室记录本中,以备溯源。
仅限科研用途:本产品严格用于实验室研究目的,未经适当监管授权,不得用于诊断程序、人体治疗或兽医临床应用。
安全操作:尽管Elamipretide是一种急性毒性相对较低的肽,仍须遵循标准实验室安全规范:佩戴适当个人防护装备(手套、实验服、护目镜),避免吸入冻干粉末,并按照机构及地方法规妥善处置废弃物。详细危害信息请参阅安全数据表(SDS)。
常见问题
Elamipretide三乙酸盐与Elamipretide盐酸盐有何区别?
两者均为同一活性四肽(SS-31)的盐型,区别在于抗衡离子不同——乙酸根与氯离子——这影响分子量,进而影响达到等摩尔浓度所需的质量。在设计实验或跨研究比较结果时,研究人员必须使用所用盐型的正确分子量(货号E1439311为三乙酸盐)以准确计算摩尔剂量。
如何配制Elamipretide三乙酸盐的储备液?
将冻干粉溶于无菌、无核酸酶的水或PBS(pH 7.4)中,配制至所需浓度(通常为1–10 mM)。轻柔涡旋至完全溶解,若用于细胞培养,需经0.22 µm滤膜过滤除菌。立即分装为单次用量,于−20°C保存,以避免反复冻融。
哪些实验方法最适合在体外检测Elamipretide对线粒体功能的影响?
最具参考价值的实验方法包括:(1)Seahorse XF呼吸仪检测耗氧率(OCR)和胞外酸化率(ECAR),以捕捉氧化磷酸化和糖酵解的变化;(2)JC-1或TMRE荧光实验评估线粒体膜电位;(3)MitoSOX Red染色检测线粒体超氧化物。根据研究问题,ATP定量实验及细胞色素c释放实验也可能具有重要价值。
Elamipretide三乙酸盐是否适合体内给药?
Elamipretide已在多种临床前动物模型中使用,最常见的给药方式为皮下注射或静脉输注。然而,给药方案、溶媒选择及给药途径必须针对每种具体动物模型和实验终点进行严格验证。研究人员在开展体内研究前,应参阅已发表文献并获得相应机构(IACUC)批准。请注意,货号E1439311以研究级试剂形式供应,不适用于临床或兽医治疗用途。
参考文献
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- Zhao K, Zhao GM, Wu D, et al. Cell-permeable peptide antioxidants targeted to inner mitochondrial membrane inhibit mitochondrial swelling, oxidative cell death, and reperfusion injury. J Biol Chem. 2004;279(33):34682-34690. doi:10.1074/jbc.M402999200
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