该实验在具有两个开放臂和两个闭合臂的类似“+”形状的装置上进行的，每个臂长 10×50 cm，高 55 cm。将动物放置其中，这意味着动物面临着探索新环境的倾向和对高空和开阔空间的恐惧之间的斗争，因此与正常动物相比，类似焦虑的状态特征是增加了开放臂的回避。

操作方法

高架十字迷宫实验（ElevatedPlusMazeTest）

原理

该实验室在具有两个开放臂和两个闭合臂的类似“+”形状的装置上进行的，每个臂长 10×50 cm，高 55 cm。将动物放置其中，这意味着动物面临着探索新环境的倾向和对高空和开阔空间的恐惧之间的斗争，因此与正常动物相比，类似焦虑的状态特征是增加了开放臂的回避。

材料与仪器

酒精喷壶，厨房用纸，高架十字迷宫，摄像跟踪系统。

步骤

1.迷宫应在隔离的房间内组装，远离噪音、气味或人运动带来的任何外来干扰。可以选择在行为实验室放置一个低强度白噪声源。应该注意的是，引导线索，例如房间周围墙上的图画，可能会将动物的活动倾斜到迷宫的某个区域。因此，任何可能作为线索的绘画或艺术品都必须被移除。

2.在整个试验过程中，实验者必须克制自己，不要发出过多的噪音或移动，不要使用香水、古龙水或任何有强烈气味的产品，因为它可能会对小鼠产生焦虑刺激。

3.必须借助照度计测量房间内的照度，保持恒定，并根据待执行的分析进行控制。考虑到低强度亮度会减少开臂回避，为了分析焦虑效应，应首选低强度照明（5-30 Lux），而应在高强度照明（200-400 Lux 或更高）下分析抗焦虑效应。

4.上述条件达标后，将动物放置在实验屋子内至少 45-60 分钟，适应环境。

5.开始测试前，用 70% 乙醇清洁迷宫，清除仪器上积聚的任何污垢或气味。

6.打开摄像机，将第一只鼠标放在迷宫的中心处，鼠面对一只开放臂（最好是与实验者相对的那只）。

7.让动物自由探索 5 分钟后取出动物。

8.必须清除所有尿液和粪便，并用 70% 乙醇彻底清洁迷宫，以清除第一只老鼠身上的任何残留气味。然后，换下一只动物。

图片引自：
Leo, L. M. and Pamplona, F. A. (2014). Elevated Plus Maze Test to Assess Anxiety-like Behavior in the Mouse. Bio-protocol 4(16): e1211. DOI: 10.21769/BioProtoc.1211.

注意事项

1.测试者尽量在测试期间远离动物视线，防止人为造成实验结果的干扰。

2.每一只动物在交替的时候，迷宫一定要用酒精擦干净气味与粪便。

常见问题

实验结果总是跳？

答：行为学的实验对于环境的要求很高，尤其是高架十字迷宫这种检测焦虑的实验，轻微的环境改变都会引起动物的焦虑行为，因此在做实验之前，最好测试者能提前 handle 动物，抚摸动物，让动物不会因为测试者而焦虑，接下来就是环境的准备，一定要干净无气味。

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