人Enterostatin(APGPR)操作与复溶实验方案
人Enterostatin(APGPR)操作与复溶实验方案
Enterostatin human是一种具有生物活性的五肽(Ala-Pro-Gly-Pro-Arg),源自前辅脂酶N端激活肽,在研究模型中因其调节膳食脂肪摄入和饱腹感信号的作用而受到广泛关注。
- 氨基酸序列
- Ala-Pro-Gly-Pro-Arg(APGPR)
- 肽链长度
- 5个氨基酸(五肽)
- 货号
- E118905
- 生物来源
- 人前辅脂酶N端激活肽
- 主要研究应用
- 饱腹感信号传导及膳食脂肪摄入调节研究
- 推荐储存条件
- -20 °C干燥保存,避免反复冻融
所需材料
操作前,请准备以下材料:
- 人Enterostatin(货号E118905,Ala-Pro-Gly-Pro-Arg)
- 注射用无菌水或磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)
- 低蛋白结合微量离心管(1.5 mL)
- 校准的微量移液器及无菌吸头
- 分析天平(如需重量验证)
- 干冰或冰桶(用于样品操作)
- 0.22 µm无菌注射器过滤器(细胞实验需无菌过滤时使用)
注意:所有与肽溶液接触的器具均应为低结合型,以减少小肽在低浓度下的吸附损失。
复溶操作步骤
按以下步骤复溶人Enterostatin(货号E118905)以备实验使用:
- 恢复至室温:开瓶前将小瓶在室温平衡10–15分钟,防止冷凝水引入冻干粉中。
- 离心小瓶:将密封小瓶短暂离心(1,000 × g,30秒),使运输中可能转移至瓶盖的粉末沉降。
- 准备复溶溶剂:使用无菌水或PBS(pH 7.4)作为主要溶剂。APGPR序列亲水性强,通常可自由溶于水性缓冲液。
- 缓慢加入溶剂:沿瓶壁缓慢加入适量溶剂,配制所需浓度的母液(推荐1 mg/mL母液浓度以便灵活使用)。勿剧烈涡旋。
- 温和混匀:旋转小瓶或轻柔地上下吹打,直至肽完全溶解。若溶液出现浑浊,在室温额外孵育5分钟后再次混匀。
- 无菌过滤(可选):用于细胞实验时,使用0.22 µm低蛋白结合注射器过滤器过滤至无菌收集管中。
- 分装储存:配制单次用量分装管,避免反复冻融导致肽降解。
重要提示:在每支分装管上记录复溶日期,复溶后的肽溶液应在下方储存条件章节推荐的时间内使用。
储存条件与稳定性
冻干粉(出厂状态):于−20 °C干燥避光保存。在此条件下,冻干肽从生产日期起预计可稳定保存至少12个月。
复溶溶液:分装后于−20 °C保存,推荐在3个月内使用。短期使用(1周内)的分装管可在4 °C保存。
多肽稳定性注意事项:
- 避免反复冻融,每次冻融均可能导致肽键水解和氧化。
- 尽量避免暴露于环境光,尤其是工作液浓度较低时。
- APGPR等小分子五肽在极低浓度下可能吸附于标准聚丙烯或聚苯乙烯表面,需使用低结合管和涂层板。
- 工作液应尽可能在实验当天从母液新鲜配制。
实验应用与给药指导
人Enterostatin(APGPR,货号E118905)用于研究膳食脂肪消耗调节、饱腹感信号通路及能量稳态的相关实验,主要应用场景包括:
- 体外受体结合与信号传导实验:用于研究肠抑素相关的结合相互作用及下游信号通路。
- 细胞功能实验:按特定实验体系确定浓度施用于细胞系,研究人员应通过剂量-效应实验确定适合其模型的工作浓度。
- 体内给药研究:在动物食物摄入调节模型中,肠抑素已通过外周和中枢给药途径进行研究,具体剂量和给药途径应参考与所用实验模型相关的已发表文献确定。
给药注意事项:工作浓度因实验格式、细胞类型和实验目的不同而差异较大。Aladdin Scientific建议研究人员在开展大规模研究前查阅相关原始文献并进行预实验剂量-效应探索。
质量检查:使用前目视检查复溶溶液,确认无颗粒物或异常颜色。APGPR在典型工作浓度下应为无色透明溶液。
安全与操作注意事项
尽管人Enterostatin(APGPR)是一种短链合成肽,在标准实验室法规下未被列为危险物质,但应始终遵循良好实验室规范(GLP):
- 穿戴适当的个人防护装备(PPE):实验服、丁腈手套和防护眼镜。
- 在低湿度环境或生物安全柜内操作冻干肽,防止吸入细粉并避免材料受潮。
- 含肽废弃物应按照所在机构的化学废物处置政策进行处理。
- 请查阅Aladdin Scientific提供的安全数据表(SDS)以获取本产品(E118905)的完整危害和处置信息。
- 本产品仅供科学研究使用,不适用于诊断、治疗或兽医用途。
常见问题
人Enterostatin(E118905)推荐使用哪种溶剂复溶?
推荐使用注射用无菌水或磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)作为主要复溶溶剂。Ala-Pro-Gly-Pro-Arg序列具有亲水性,可轻松溶于水性缓冲液。除非实验方案特别要求,否则避免使用有机溶剂。
复溶后的人Enterostatin应如何储存,可保存多长时间?
复溶后的分装液应于−20 °C保存,推荐在3个月内使用。若在一周内短期使用,可在4 °C保存。冻存前应预先配制单次用量分装管,避免反复冻融。
Ala-Pro-Gly-Pro-Arg序列的生物学意义是什么?
APGPR五肽是人源肠抑素,由前辅脂酶N端激活肽在胰腺分泌过程中经胰蛋白酶切割产生。该肽作为信号肽在研究模型中被广泛研究,涉及选择性抑制膳食脂肪摄入和调节饱腹感的功能,其特定受体相互作用和下游机制仍是活跃的研究领域。
人Enterostatin(E118905)能否用于细胞实验?
是的,人Enterostatin可用于细胞实验。对于此类应用,建议在使用前通过0.22 µm低蛋白结合注射器过滤器对复溶液进行无菌过滤。工作浓度应针对每种细胞系和实验格式进行实验优化,因为适宜浓度因实验条件而异。
如何在实验中最大程度减少多肽吸附损失?
实验全程使用低蛋白结合微量离心管、移液吸头和多孔板。在可行的情况下以较高浓度配制工作液,临用前稀释。避免将稀释的肽溶液在标准聚丙烯或聚苯乙烯容器中长期储存。
参考文献
- Erlanson-Albertsson C, York D. Enterostatin — a peptide regulating fat intake. Obes Res. 1997;5(4):360–372.
- Erlanson-Albertsson C. The role of enterostatin in the regulation of food intake. Physiol Behav. 1992;52(5):953–958.
- Liddle RA. Enterostatin: a potential mediator of fat-induced satiety. Proc Soc Exp Biol Med. 1995;210(3):191–196.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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