(来源：生物化学与分子生物学实验指导，邵雪玲等，武汉大学出版社，2003)

操作方法

苯酚-硫酸法

原理

苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，己糖在490 nm处（戊糖及糖醛酸在480 nm）有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。

材料与仪器

葡萄糖
浓硫酸 苯酚
试管 试管架 移液管 量筒 烧杯 离心管 玻璃碾磨器 离心机 分光光度计

步骤

1. 材料的处理:将0.5～1 g所测的材料捣碎，用适量蒸馏水、玻璃碾磨器碾磨并分次抽提，混合液离心得抽提液即样品液。
 
2. 标准曲线制作:取50 μg/ml的己糖标准溶液0 ml，0.1 ml，0.2 ml，0.3 ml，0.4 ml，0.5 ml于试管中，用水补足到0.5 ml，加0.3 ml 5%酚溶液，混匀后快速加入1.8 ml浓硫酸，振荡混匀，室温放置20  min即可出现橙黄色，以第一管调零点，可于490 nm处比色测定读OD 值。以糖含量为横坐标，相应的 OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 样品含量测定:取0.5 ml内含2～25μg糖量，同样加入0.3 ml 5%酚溶液，混匀后立刻沿管壁加入浓硫酸1.8  ml，振荡混匀，达室温后，可测490 nm处的 OD 值，从标准曲线上查相应糖含量。

注意事项

1. 几种己糖测定方法中所使用的显色剂，如蒽酮、间苯二酚等，都需要沸水浴加热，而本法不需要，且蛋白质的存在对本法的显色反应影响不大，故也可用于糖蛋白中的己糖测定。除此之外，还可用于己糖甲基化衍生物和6－脱氧核糖、戊糖的测定。

2. 本法的热量来自浓硫酸与水的混合，因此加浓硫酸时反应快，且立即混匀，试管应大一些，以免烫手。

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