在药理学实验中，影响实验结果的因素很多，有些因素是可以控制的，有些则难以控制，为了减少多因素及难以控制因素的影响，实验中应同时设立对照组，用对照组和实验组间的比较来消除各种无关因素的影响，使实验结果误差尽可能地缩小，达到正确评价药物效果的目的。观察静脉注射酚红后，不同时间内血浆药物浓度的变化。掌握血浓测定方法，血浆半衰期（t1/2）及表观分布容积（Vd）的计算。

操作方法

酚红指示法

原理

酚红(PSP)为指示剂,在碱性环境中呈现紫红色。PSP 静脉注射后，在体内不代谢，其消除主要由肾脏近曲小管分泌.因此可通过比色测定不同给药时间血浆中PSP 的光密度值,定量计算血中PSP的浓度。

材料与仪器

家兔
酚红溶液 稀释液 氢氧化钠 溶液 75%酒精 肝素钠 生理盐水
分光光度计 离心机 兔台 兔固定绳 手术器械 丝线 注 射器 针头 抗凝试管 离心试管 动脉夹 擦镜纸 滤纸 定量加样器

步骤

1.  麻醉并固定：取健康家兔一只，称重， 3%戊巴比妥钠1 ml /kg耳缘静脉注射麻醉，仰卧位固定在兔台上。
 
2.  手术：纵向切开颈部正中皮肤，分离颈下组织，找到气管，在气管一侧分离出颈总动脉，从颈总动脉下穿两线待用。由耳缘静脉注射肝素钠1 ml /kg，结扎远心端，近心端用动脉夹夹住，两端之间留2 cm 距离，用眼科剪在远心端朝近心端方向呈45 度角剪小口，然后朝向心方向插入塑料管，推进1～2 cm结扎并固定，塑料管用止血钳夹住，松开动脉夹。
 
3.  取空白血：自动脉导管取血约1 ml，置于编号的干燥抗凝试管中，轻摇混匀。
 
4.  给药及取血样：从耳缘静脉注射6 ml/kg 0.6%酚红溶液，给药后2.  5.  10.  20 和30分钟分别取血约1 ml，置于编号的干燥抗凝试管中，轻摇混匀。
 
5.  离心和测定：各取定量血样于编号离心试管中，以3000转/分离心10 分钟，分别取血浆0.1 ml，加入清洁编号试管内，加稀释液各2 ml，摇匀后静置5 分钟，以给药前血样做空白对照调零，于分光光度计560 nm波长处进行比色测定，记录其光密度值。将给药后不同时间的光密度输入计算器，计算出不同时间酚红的血浆浓度。
 
6.  制作酚红溶液1.  2.  4.  8.  16 umol·L^-1标准曲线（由老师率先绘制）
 
实验结果及分析：
 
以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程。
 
以血浆药物浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标绘制时量曲线，一级消除动力学的时量关系呈直线。
 
该直线的方程式为logC_t=lgC_O-k/2.303·t
 
药物血浆半衰期T1/2=0.693/k(单位：h或min)
 
Vd=A/C₀（A为给药总量）
 
用FX-3600P计算器，采用直线回归的运算程序，计算出不同时间酚红的血浆浓度。
 
血样药浓记录表
 

注意事项

1.  分离颈总动脉时，要把神经分离开，结扎的时候不能结扎神经。

2.  用取液器取上清液的时候，小心谨慎，不要取出血。

3.  离心时应将取血试管平衡后对称置入。

4.  禁止用手接触比色皿的光面，若有液体，只能用擦镜纸。

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