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操作方法

二氯荧光素量子产率的测定实验

原理

荧光分析法在有机电致发光、生物医药、临床诊断等领域得到广泛应用。高性能荧光材料的制备已成为这些领域的研究热点与前沿，而这些荧光材料的荧光量子产率的高低直接影响它们的性能优劣。荧光量子产率（YF）即荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发光的光子数之比值。它的数值在通常情况下总是小于1。YF的数值越大则化合物的荧光越强，而无荧光的物质的荧光量子产率却等于或非常接近于零。荧光量子产率一般采用参比法测定。即在相同激发条件下，分别测定待测荧光试样和已知量子产率的参比荧光标准物质两种稀溶液的积分荧光强度（即校正荧光光谱所包括的面积）以及对一相同激发波长的入射光（紫外-可见光）的吸光度，再将这些值分别代入特定公式进行计算，就可获得待测荧光试样的量子产率：Yu = YundefinedFu/Fs *As/AuYu、Ys -待测物质和参比标准物质的荧光量子产率；Fu、Fs -为待测物质和参比物质的积分荧光强度；Au、As -为待测物质和参比物质在该激发波长的入射光的吸光度（A=εbc）。运用此公式时一般要求吸光度As、Au低于0.05。参比标准样最好选择其激发波长值相近的荧光物质。有分析应用价值的荧光化合物的Yu一般常在0.1-1之间。

步骤

1.配制二氯荧光素（0.25μg·mL-1）待测试样溶液(含1.0mol·L-1 NaOH水溶液)，罗丹明B（0.25μg·mL-1）参比标准溶液（溶剂为无水乙醇）；

2.打开分子荧光光谱仪和紫外－可见分光光度计；

3.移取所需浓度的二氯荧光素与罗丹明B溶液，用相应溶剂稀释至10.0 mL（A505nm<0.05），在紫外－可见分光光度计上测定其吸收光谱曲线；分别测定它们在505 nm处的吸光度。

4.移取上述相同的溶液于荧光比色皿中，在荧光仪上分别扫描其荧光激发光谱及发射光谱；分别测定它们以505 nm为激发波长时的荧光发射光谱。

常见问题

数据处理

1.计算二氯荧光素和标准物质罗丹明B的荧光光谱的相对积分面积。

2.从相关资料查阅参比标准物质罗丹明B在乙醇溶剂中的量子产率。

3.将所获得的各相关数据代入荧光量子产率计算公式计算二氯荧光素溶液的量子产率数值。

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