核酸是多聚阴离子的水溶性化合物，可以与许多1价、2价离子结合形成盐类，后者在有机溶剂中不溶解也不变性．在较低温度下形成沉淀．本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

醋酸钠乙醇沉淀法核酸纯化实验

原理

核酸是多聚阴离子的水溶性化合物，可以与许多1价、2价离子结合形成盐类，后者在有机溶剂中不溶解也不变性．在较低温度下形成沉淀．

材料与仪器

待纯化样本
醋酸钠缓冲液 无水乙醇 70%乙醇

步骤

实验试剂：

1. 3mol／L醋酸钠缓冲液，pH5.2：称取醋酸钠（NaAC·3H20）408.1g，由于800ml水中，用冰醋酸调节至pH5.2，加重蒸馏水至1000ml．分装后高压灭菌（以下称3mol/L醋酸钠缓冲液）．

2．无水乙醇及70％（V／V）乙醇．

实验操作：

1. 将含核酸的溶液用移液器转至一新的Eppendorf离心管，同时测量合算溶液的体积．

2. 加入1／10体积的3 mol／L醋酸钠缓冲液。使醋酸钠的终浓度为0.3mo1/L．

3. 下颠倒混匀后，准确加入2倍体积（RNA为2.5倍体积）的预冷无水乙醇，颠倒混匀，置冰浴中15－30 min或一20℃30 min。

4. 4℃12000 r／min，离心15 min．

5. 手持Eppendorf成45度角，使核酸沉淀面向上，用微量移液器或连接真空泵的吸头不可接触沉淀物．

6. 向管中加入预冷的70%乙醇至2／3体积．混匀漂洗，以除去残余的盐．

7. 4℃12000 r／min离心 2min，如步骤5吸取上清液．

8. 不盖管盖置室温10－l5min或真空中2 min，使乙醇挥发。

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