将减数分裂产物从子囊中释放出来，通过超声破裂，直接铺在琼脂平板上，孢子菌落可以通过影印平板法来筛选目的基因型。

操作方法

基本方案

材料与仪器

酵母菌
2-疏基乙醇 乙醇 酵母裂解液
超声发生器 探头 离心机

步骤

1.  制备可供剖分四分体用的细胞。如果孢子在平板上形成，可用牙签挑起孢子放入装有5 ml 水的50 ml 烧瓶中；如果孢子在液体培养基中形成，可将1 ml 培养液加入5 ml 水中。然后加入0.5 ml 酵母裂解酶-20T溶液和10 μl 2-巯基乙醇，于30℃摇床缓缓摇动下培养过夜。   2.  加入5 ml 1.5%NP-40溶液，将混合悬液移到一支一次性的15 ml 试管中，冰浴15 min。   3.  超声波处理之前要清洁超声探头。先用清水洗，再用乙醇冲洗，然后将超声探头插入装有混合悬液的试管，并尽可能地插到液体中，但不要触到管底或管壁。以50%~70%的满功率超声30 s，置冰浴中2 min，重复2次。

4.  以1 200 g 离心孢子10 min，吸去或倒去上清，再用5 ml 1.5%NP-40重悬沉淀，在旋涡混合器上剧烈振荡，重复2次。

5.  按步骤3超声（重复），最后一次超声后检查孢子。   6.  1 200 g 离心孢子10 min，吸去或倒掉上清，然后用5 ml 水重悬，在旋涡混合器上剧烈振荡混匀，重复1次。

7.  用血细胞计数板计算10倍稀释处理的孢子悬液，用水稀释直到孢子浓度为10³孢子/ml 每个平板涂布100 μl 孢子稀释液，然后于30℃培养3天。

8.  影印平板，筛选目的孢子菌落。

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