该实验主要用于建立体外肿瘤细胞模型，试验药物抗性。

操作方法

细胞培养技术

原理

体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性，最终筛选出具有一定抗性的细胞克隆。

材料与仪器

小鼠
小牛血清 DMEM DOX
CO2培养箱 无菌钢圈

步骤

一、培养条件

用含10%小牛血清的DMEM培养液，5%CO₂，37℃培养。

二、实验步骤

1.  将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中，先用DOX（阿霉素）0.01 ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。

2.  然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml，接着进行DOX低浓度的筛选。

3.  随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC₁作CHO和RC₁对DOX的剂量-反应曲线，求CHO和RC₁的IC₅₀值。

4.  抗性倍数即为RC₁的IC₅₀与CHO的IC_50。

注意事项

1.   要具备培养细胞的实验室条件，谨防污染。

2.  通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC50值，以确定其实诱导浓度。

3.  采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株，对阿霉素等产生抗性的细胞株，往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。

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